Кюнель откосы отзывы: конструкция с наличником, монтаж и установка системы, преимущества и недостатки продукции, отзывы — ИНВЕСТИЦИОННЫЙ ПОРТАЛ ВОЛГОГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ

17.05.2021

Содержание

конструкция с наличником, монтаж и установка системы, преимущества и недостатки продукции, отзывы

Окна подбираются людьми сейчас очень тщательно, с учетом технических и эстетических моментов в полной мере. Но кроме самого оконного блока, внимание стоит уделить и откосам, которые должны вписываться в ансамбль интерьера очень хорошо. Специалисты придумали делать такие конструкции из прочного к удару пластика, экологически чистого по составу.

Особенности

Заводской откос проектируется таким образом, чтобы он выглядел единым целым с устанавливаемым окном. Добиться столь притягательного эффекта за счет оштукатуривания проема не получается. А вот профессиональные системы, выпускаемые под брендом Qunell, полностью удовлетворяют такому требованию. При работе не потребуется тратить много усилий, да и стоимость вполне приемлемая.

В процессе монтажа используются тщательно продуманные замки и защелки, что куда надежнее, чем клеевые либо штукатурные связки.

Исполнение

Типовая защелка изначально рассчитывается на литое соединение, связываемое без малейших промежутков. Специальный подбор пластмасс позволяет исключить их разрушение при выполнении различных манипуляций. Поверхность будет совершенно свободна от лишних элементов, окажется совершенно гладкой и ровной на вид.

Разработчики фирмы позаботились о том, чтобы можно было сочетать откосы с наличниками и окнами различных цветов и фактур. Желающие смогут как выбрать имитацию природной древесины, так и отдать предпочтение простой монотонной окраске.

Положительные и отрицательные стороны

Европейская компания выпускает продукцию уже довольно давно.

Она сумела добиться:

отбора превосходных материалов;
тотальной экологической и санитарной безопасности;
предотвращения образования конденсата и промерзания конструкции;
высочайшей герметичности систем;
строгого исполнения российских и международных стандартов качества.

Профессиональным исполнителям, судя по отзывам, удается выполнить монтаж продукции Qunell максимум за 60 минут. Это время учитывает все работы, даже подсоединение розеток и проводки в месте, где монтируется откос.

Заказчики могут сами выбирать окраску и фактуру декоративных элементов, поскольку компания позаботилась о максимально широкой гамме вариантов.

Технических и эстетических недостатков откосы не имеют. Единственная проблема — высокая цена, но это вполне объяснимо тем старанием, с которым такая продукция изготавливается.

Фурнитура и дизайн

Панель версии KNL позволяет обеспечить надежную установку к стенам и оконным либо дверным рамам, гармоничное прикрытие наличниками. Для этого разработчики системы предусмотрели особые замки.

Панель может иметь величину от 15 до 60 см, шаг составляет 5 см. Такие габариты означают гибкость использования и возможность решения каких угодно задач по формированию проемов. И также в линейке компании есть декоративные наличники шириной 7,5 см, они помогут замаскировать стыки и другие стеновые дефекты.

Размещение наличников обособленно от панелей делает проем визуально объемнее, что наиболее значимо для отделки узких окон. При помощи начальных U-профилей можно прикрепить пластиковые детали к оконным рамам либо дверям. Такие блоки за счет небольшого выступа блокируют возникновение промежутков до основных конструкций. Конечно, инженеры фирмы позаботились о том, чтобы подобные профили были декоративными, имели красивое фигурное устройство.

В состав откоса входят особые угловые крышки, которые эстетичны внешне и не имеют проблем с подрезкой наличников под углом в 45 градусов.

Дополнительно стоит упомянуть о защелке, фиксирующей панель к стене: она отвечает еще за закрепление наличников и за присоединение угловых крышек. На этом ассортимент деталей не заканчивается, есть также подоконники, решетки для вентиляции и заглушки для нее, монтажные шаблоны. Откосы Qunell визуально совместимы с деревом, пластиком и алюминием в одинаковой степени. Фирма готова поставлять комплекты продукции, ориентируясь на типоразмеры проемов.

Смонтировать набор на готовое окно можно без покупки сложных инструментов — разработка «прощает» промахи в нарезке и даже в кривизне самих проемов.

Типовая ламинация под светлую дубовую древесину и белую шагрень на складах есть всегда, как и золотистый дуб. Если требуется оригинальная ламинирующая пленка, можно сделать заказ, получив изделие в кратчайший срок. Инженеры продумали различные аспекты — гигиенические, экономические (минимальное вторжение в проемы и подоконники). Компания Qunell производит все свои товары с заботой о минимальных сроках строительных работ. Обрамление проема позволяет его вентилировать и утеплить, а не просто придать оригинальный дизайн.

Процесс монтажа откосов Qunell смотрите ниже.

Как выбрать откосы QUNELL в 2020 году? Какие откосы лучше? Всё что нужно знать об откосах Qunell — виды, преимущества, недостатки: фото+видео+отзывы+вопрос/ответ

Рассчитать стоимость

Причины купить у нас

Как заказать

определяетесь с цветом откосов
замеряете размеры по глубине, высоте и ширине,также можете заказать заказать нашего специалиста
расчитать стоимость откосов можно позвонив нам или оставить заявку на Viber (073 660 10 70) а мы посчитаем и перезвоним

на сайте есть стоимость откосов на типовые размеры окон
забираете откосы у нас на складе или оформляйте доставку к Вам на адрес.Если Вы не из Одессы, то мы отправим любым удобным перевозчиком.

Причины купить у нас

мы являемся оригинальным магазином откосов QUNELL. У нас есть в наличии все цвета
самая низкая цена,так как работаем напрямую с заводом
бесплатная доставка по Одессе. По Украине бесплатно доставим при заказе более 7000 грн.
выгодные предложения для монтажных бригад, строительных и оконнных компаний

Декоративная откосная система

QÜNELL — ОТКОСЫ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ

Уникальность декоративной откосной системы QUNELL

элементов системы

Откосная система QUNELL состоит из 5 элементов: стартовый профиль, панель откоса, универсальная защелка, наличник и крышка угловая.

Каждый из элементов подогнан на производстве для идеального и быстрого монтажа.

Заводской продукт в виде готового комплекта

Откосы QUNELL – это заводской продукт в виде готового к монтажу комплекта. Каждый комплект на оконный, балконный или дверной проемы упакован в фирменныйкартонный короб с вложением Паспорта Товара.

Высочайшее качество в каждом элементе

Система элементов QUNELL производится из высококачественного экологически чистого сырья по ГОСТам и нормам оконного профиля лучших европейских производителей. Каждый из элементов является уникальной разработкой.

Сертификация

QUNELL – это единственные сертифицированные откосы, получившие положительные Протоколы испытаний на: горючесть, токсичность, ударопрочность, светостойкость, долговечность и др. В Украине откосная система получила сертификат санитарной эпидемиологической экспертизы, что подтверждает безопасность, экологичность продукта и возможность монтажа во всех типах помещений как снаружи так и внутри, в том числе медицинских и дошкольных учреждениях.

Уникальность декоративной откосной системы QUNELL

5 элементов системы

Откосная система QUNELL состоит из 5 элементов: стартовый профиль, панель откоса, универсальная защелка, наличник и крышка угловая. Каждый из элементов подогнан на производстве для идеального и быстрого монтажа.

Заводской продукт в виде готового комплекта

Высочайшее качество в каждом элементе

Сертификация

Преимущества системы QUNELL над популярними откосами

ТРЕЩИНЫ, ГРИБОК, ПРОМЕРЗАНИЕ, ИСПОРЧЕННЫЙ ВНЕШНИЙ ВИД

СТИЛЬ ДИЗАЙНА ИТАЛЬЯНСКАЯ КЛАССИКА. ЛЮБОЙ ЦВЕТ. ВАРИАНТЫ ДЕКОРАЦИИ: ЛАМИНАЦИЯ, ОКРАШИВАНИЕ, УФ-ПЕЧАТЬ

Преимущества системы QUNELL над популярними откосами

ТРЕЩИНЫ, ГРИБОК, ПРОМЕРЗАНИЕ, ИСПОРЧЕННЫЙ ВНЕШНИЙ ВИД

СТИЛЬ ДИЗАЙНА ИТАЛЬЯНСКАЯ КЛАССИКА. ЛЮБОЙ ЦВЕТ. ВАРИАНТЫ ДЕКОРАЦИИ: ЛАМИНАЦИЯ, ОКРАШИВАНИЕ, УФ-ПЕЧАТЬ

Декоративные возможности откосной системы QUNELL

БЕЛАЯ КЛАССИКА

КОМБИНИРОВАНИЕ

Все элементы системы выполнены в белом цвете и идеально сочетаются с белыми окном и дверью.

Проемы получаются декоративно оформленным и законченным

Закажите прямо сейчас!

Вариант декорации ламинация – это окутывание элементов системы декоративной пленкой. В данном случае ОРЕХ.

Структура дерева и благородный цвет станут настоящим украшением оконного или дверного проема и подчеркнет общее настроение интерьера

Закажите прямо сейчас!

Позволяет фантазировать и сочетать элементы системы различных видов декорации. Например, белая панель откоса и ламинированные в ТЕМНЫЙ ДУБ наличник и угловые крышки.

В результате яркий акцент в интерьере.

Закажите прямо сейчас!

Этот вариант декорации выполняется методом окрашивания элементов откосной системы качественными швейцарскими красками для пластика FEYCO в желаемый цвет.

Это полет фантазии и уникальный дизайн интерьера в любом стиле.

Окно или дверь превращаются из «коробок» в яркий акцент и дизайнерский элемент декора.

Закажите прямо сейчас!

Инновационный и самый сказочный вариант декорации. Современные технологии печати способны воплотить любую идею.

Оконный или дверной проем, оформленные УФ-печатью – это настоящий фонтан счастья и радости при каждом взгляде на него! Персонажи мультфильмов, цветы и узоры, полоски и квадратики — пожалуйста! Например, Хеллоу Китти украсили оконный проем, а дверь декорирована ростомером! Восторг!

Закажите прямо сейчас!

Альбом решений

Видео-отзывы

Елена Борисовна
Евдокия Петровна
эксперт Роман Евглевский
видео-отчет До и ПОСЛЕ

Вопрос-ответ про откосную систему QUNELL:

Что такое комплект откосной системы?
Комплект откосной системы Qunell включает в себя всё необходимое для обрамления оконного или дверного проёма, а именно: три стартовых профиля, три панели откоса, три наличника, две крышки угловые и необходимое количество защёлок, фирменную упаковку, паспорт качества товара.
Нужно ли подготавливать проем для монтажа системы?
Нет. Монтаж откосной системы Qunell не требует предварительной подготовки чернового проема.
Можно ли устанавливать систему на неровные стены?
Да, можно.Примыкание наличника решается с использованием дополнительных защёлок.
Желтеют ли со временем откосы Qunell?
Нет. В состав ПВХ-композиции вводятся специальные добавки, стабилизаторы, чтобы в своем естественном состоянии они не выделяли вредных веществ, были долговечными и имели устойчивость к ультрафиолету. Сама сырьевая смесь аналогична смеси для производства окон высокого качества.
Почему систему называют декоративной?
Изюминка откосной системы Qunell заключается в её внешнем виде, в уникальном дизайне элементов и в целом всей конструкции. Откосная система Qünell – это не просто откос как часть проема. Qunell- это стиль, дизайн и индивидуальность.
Цветовая гамма?
Откосная система Qunell может быть белой и заламинированной (декоры под дерево). Может окрашиваться согласно раскладке RAL специальными красками для ПВХ изделий– FEYCO (Швейцария).
Что такое УФ-печать?
Метод декорации откосной системы Qunell как УФ-печать — это уникальное предложение оформить оконный или дверной проем с нанесением любого рисунка на поверхность. Рисунок в векторе с детальным размещением на поверхности передается в типографию и наносится методом ультра фиолетовой печати. Фантазия без границ и Ваше индивидуальное решение.

Купить откосы Qunell в Одессе и области недорого

Предлагаем заказать откосы Кюнель в компании Okna City, у нас оригинальная продукция, большой выбор, доступные цены и профессиональный монтаж. Мы быстро доставим Ваш заказ, установим откосы, и менее чем через 2 часа Вы будете наслаждаться стильным интерьером Вашего дома или квартиры. Получаем продукцию напрямую от завода-изготовителя, поэтому никаких переплат, длительного ожидания заказа и несоответствия между картинкой и реальностью.

Установка откосной системы Qunell не требует каких-либо особых навыков, её может установить практически каждый человек. Но всё же мы рекомендуем заказать установку у нас, так как профессиональный монтаж всегда выгоднее по времени и результату, что в конечном счёте сказывается и на деньгах. Профессионально установленные откосы будут выглядеть лучше и служить дольше, никаких изъянов и погрешностей — наши специалисты устанавливают идеальные откосы.

Оригинальная откосная система Qunell в Одессе — лучший выбор

Фирменная откосная система Qunell состоит из 5 частей, она быстро и легко собирается и устанавливается. А после установки не требуется проводить дополнительные отделочные работы. В комплект входят следующие элементы:

наличник,
панель откоса,
стартовый профиль,
крышка угловая,
защёлка.

Наличник, стартовый профиль, панель откоса производятся из ПВХ-смолы, мела, аддитивов и др. стабилизаторов с помощью экструзии. Крышка и защёлка производятся путём литья, первая — из ударопрочного полистирола, вторая – из полипропилена.

Наличник откоса

Наличник — декоративная часть, придаёт целостность и завершённость композиции, может скрыть небольшие дефекты стены (если они есть). Дизайнеры продумали лучшие решения для оформления проёма. Наличник мы устанавливаем 2 способами:

без откосной системы с использованием защёлки и др. методов;
без крышки угловой: наличники подрезаются под углом 450.

Панель откоса

В панели откоса расположен особенный замок, который защёлкивается двумя элементами:

Нижний — защёлкивает и фиксирует откосы;
Боковой — фиксирует наличник.

Стартовый профиль откоса

Стартовый профиль связывает панель откоса и профиль (раму окна, двери). Уникальность стартового профиля в том, что он не допускает образования щелей между проёмом и элементом, поэтому не нужно использовать герметики. Стартовый профиль может применяться отдельно от системы, крепится саморезами.

Крышка угловая откоса

Это декоративный элемент для обрамления защёлок, он соединяет вертикальные и горизонтальные части наличника. Теперь не требуется подрезать наличники под углом 45°, а значит, время монтажа сокращается. Единый размер с наличниками обеспечивает идеальное прилегание без швов.

Защёлка откоса

Защёлка прикрепляет откосную систему к проёму, наличник — к стене по периметру и крепит крышку угловую. Использование защёлки позволяет отказаться от клея и герметика, а это сокращает монтажные работы и продлевает срок эксплуатации откосов.

Хотите красиво и качественно оформить откосы на дверных и оконных проёмах? Лучший вариант — заказать откосы Кюнель в Okna City для внутренней и внешней отделки. При необходимости мы поможем сделать правильный выбор, проконсультируем, быстро доставим Ваш заказ и качественно установим. Звоните прямо сейчас, чтобы выбрать откос для стильного оформления интерьера и экстерьера.

Почему выгодно купить откосы Кюнель в Одессе в компании Okna City

Предлагаем Вам лучшие условия для покупки откосной системы Qunell:

фирменная продукция с гарантией и паспортом;
большой выбор цвета и фактуры;
низкие цены;
комплексный пакет услуг: консультация, быстрая доставка и профессиональный монтаж;
гарантийное обслуживание;
соблюдение сроков;
подписание официального договора;
индивидуальный подход к каждому клиенту.

По всем вопросам относительно заказа откосов Qunell, обращайтесь к нашим менеджерам, они с радостью ответят на все вопросы, проконсультируют и помогут подобрать и купить Qunell в Одессе и области недорого.

Как выбрать откосную систему QUNELL в 2020 году?

Откосы QUNELL прекрасно впишутся в дизайн каждого помещения, достаточно определиться со стилем и выбрать соответствующее оформление. Например для комнаты в классическом стиле прекрасно подойдут белые откосы или ламинированные под дерево откосы Qunell, для детской комнаты интересно смотрится ламинация либо окрашивание на контрасте или наоборот цвет-компаньон декоративного элемента. А вот УФ-печать станет настоящей изюминкой, ведь напечатать на откосах Кюнель можно всё что угодно: любимые мультяшки, цветы, узоры… в общем всё, что захочется. В помещениях с минималистическим дизайном стильно смотрятся комбинированные откосы.

В любом случае, какой бы откос QUNELL Вы не выбрали, служить он будет долго и радовать своей красотой. Основное — это выбрать оригинального представителя, чтобы продукция была действительно от производителя QUNELL. Компания Okna City имеет все подтверждающие документы относительно оригинальности продукции. Если Вы не можете определиться, звоните — наши специалисты всегда помогут с выбором.

Какие откосы лучше?

Рынок предлагает 3 вида откосов:

штукатурные;
гипсокартонные;
пластиковые.

Штукатурные откосы холодные, они плохо переносят перепады температуры, это приводит к тому что со временем может появиться конденсат, влага, а затем и грибок. Кроме того, штукатурка плохо соединяется с рамой, со временем это приведёт к растрескиванию и отслоению откоса. Откос из штукатурки — долгий и трудоёмкий процесс, так как требуется поэтапное наложение слоёв и хороший профессионализм, чтобы сделать откосы ровными, симметричными и аккуратными.

Гипсокартонные откосы имеют подобные недостатки, кроме этого их необходимо хорошо закрепить, прогрунтовать и покрасить. По стоимости они дороже штукатурных откосов.

Специальные пластиковые откосы Qunell устанавливаются очень быстро, не боятся холода и влаги, не выгорают на солнце. При повреждении какого-либо элемента откоса, он легко и быстро меняется на новый. Пластиковые откосы Кюнель завоевали свою популярность благодаря отличным характеристикам, длительному сроку эксплуатации, великолепному внешнему виду. Учитывая данные критерии, выгоднее заказать откосы Кюнель — они оправдают вложенные средства, усилия и доверие.

Выбирая лучшее, Вы в выигрыше всегда.

Если у Вас остались вопросы — звоните, мы проконсультируем и поможем сделать правильный выбор откосов Кюнель в Одессе и области.

Откосы кюнель

В старом жилье при замене и отделке окон без выравнивания плоскости стены системные обрамления КЮНЕЛЬ значительно превосходят все иные отделочные материалы. Широкие благородные наличники не только скрывают неровности стен или выравнивающий каркас, но и придают установленному окну завершенный вид. Угловая крышка «снисходительна кошибкам» до 5 мм при отрезании наличника.

«КЮНЕЛЬ» по-новому представляет отделку окна — как неотъемлемую часть, как продолжение окна (или двери). Это специально созданные красивые и прочные системные обрамления, решающие практически все проблемы вокруг окна — от вентиляции проема до дизайна. При этом обрамления высокотехнологичны в сборке и доступны по «бюджетной» цене.
В индустриальном строительстве с применением «КЮНЕЛЬ» значительно сокращаются затраты на отделку.
Полное обрамление состоит из двух систем: системы откоса и системы подоконника. Система отделки откоса включает конструкционно прочную, толщиной 10-мм панель шириной 600 мм с двусторонним замком, (односторонний 400, 300 и 200 мм), наличник фигурный шириной 76 мм (перекрывающий любую кривизну проема), клипсы для крепления на стене и фиксации наличника, соединительные уголки, угловую крышку.
Система позволяет делать откосы с «рассветом», имеет угловую крышку, позволяющую не зарезать наличник под 45 градусов.

Система подоконников не имеет аналогов на рынке, имеет стильную фасадную панель — кабель-канал с декоративными вставками, комплектуется алюминиевыми вентиляционными решетками и шаблонами для врезки.
Комплексно решая дизайн, подводку арматуры в зону окна и вентиляцию окна, такая подоконная система быстро находит своего Заказчика — офисы, больницы, школы.

QUNELL — система пластиковых откосов премиум — класса.

Система пластиковых откосов Qunell это новейшая система, разработанная австрийскими специалистами для комплексной и эстетически завершенной отделки как оконных, так и дверных проемов. Наличие в системе всех необходимых для монтажа элементов, освобождает от использования дополнительных крепежей, герметиков и клея, тем самым ускоряя и облегчая процесс установки откосов.

Ранее отделка откосов считалась делом второстепенным, не требующим особых дизайнерских и инженерных решений. Но, современные технологии не стоят на месте, и на смену устаревшим гипсокартону, штукатурке, сэнвич панелям пришли новые материалы, способные кардинально изменить подход к отделке оконных и дверных откосов.

Инновационные пластиковые откосы способны создать высокую конкуренцию своей простотой установки, доступной ценой, качеством исполнения и эстетичностью. Благодаря высококачественному пластику откосы для окон будут ровными, гладкими, с возможностью выбора любимого цвета, что можно использовать как отличное дополнение дизайна комнаты!

Заказать откосную систему КЮНЕЛЬ Вы можете в нашей компании!

ЗВОНИТЕ 8 (831) 416-15-95

Откосы Qunell (Кюнель) для окон

Откосы из пластиковых ПВХ панелей Qunell (Кюнель) сохранят тепло в помещении и создадут гармоничную завершённость оконного проёма, лучшее решение в Киеве

Восстановление откосов из ПВХ панелей Qunell (Кюнель) для оконных и дверных проёмов.

Откосы QUNELL (Кюнель) – это прекрасная альтернатива привычным штукатурным, гипсокартнным и пластиковым откосам с утеплением. Ещё совсем недавно многие заказчики отдавали предпочтение откосам с утеплением.

С откосами QUNELL (Кюнель) легко создать завершённость оконного либо дверного проёма. Быстрый, чистый монтаж, аккуратный вид оконного проёма, минимум времени – это новое поколение откосов QUNELL (Кюнель). Установка откосов Кюнель создаст в вашем доме индивидуальный стиль, подчеркнёт дизайнерские нотки интерьера.

Для производства откосов Кюнель применяется высококачественное экологичное сырьё, которое соответствует ГОСТу и всем требованиям для оконных профилей ведущих европейских производителей. Откосы QUNELL (Кюнель) изготавливаются и комплектуются на производстве. Каждый заказ имеет отдельную упаковку с полной комплектацией для установки в оконный проём металлопластикового окна или балконного блока, а также Паспорт Товара от завода-производителя откосов QUNELL.

Откосы QUNELL (Кюнель) имеют сертификат эпидемиологической экспертизы, который подтверждает безопасность, экологичность и разрешает установку в детских школьных, дошкольных, медицинских учреждениях.

Откосы QUNELL (Кюнель) – полное совпадение по цвету с установленными металлопластиковыми окнами. Для их ламинации используется плёнка Renolit, которая применяется в оконном производстве.

С откосами Кюнель Вы можете создать свой дизайнерский рисунок. Наносится рисунок с помощью УФ – печати высокого качества. Откосы с вашим рисунком позволят подчеркнуть индивидуальность вашего помещения.

Возможность демонтажа откосов QUNELL (Кюнель) во время ремонта, позволяет сохранить первоначальный вид откосов. Для этого нужно снять угловые крышки и наличники откосов, а по завершению ремонта установить их на свои места.

Система откосов QUNELL (Кюнель) позволяет установку как внутри помещения, так и снаружи. Откосы надёжно защищены от выгорания и различных погодных условий.

Как и для металлопластиковых окон, в уходе за откосами QUNELL (Кюнель) запрещается применение абразивных чистящих, моющих средств, в составе которых ацетон, спирт. Загрязнения легко убираются с помощью мыльного раствора.

Пластиковые откосы QUNELL (Кюнель) – это надёжность, индивидуальность, качество, безопасность. QUNELL (Кюнель) рассчитаны на многие годы эксплуатации. Свяжитесь с нашими менеджерами и ваши мечты по оформлению откосов станут реальностью.

Что представляет собой откосная система Qünell

Содержание статьи

Отделка внутренних и внешних откосов не займет много времени и будет выполнена максимально качественно даже без привлечения профильных специалистов, если использовать новые методики. Система Qünell (Кюнель) специально разработана для оконных и дверных проемов и вобрала в себя все лучшие наработки от существующих популярных технологий. Эти надежные, экологичные, влагостойкие и практичные откосы способны прослужить свыше 40 лет. Они отлично сочетаются с любыми типами окон и подходят для эксплуатации в жилых, муниципальных и коммерческих объектах.

Что представляют собой откосные системы Qünell

Qünell – быстро ставшая популярной на строительном рынке австрийско-белорусская торговая марка.

Владельцы этого бренда разработали уникальную откосную систему, имеющую разумную стоимость и представляющую собой своего рода конструктор, собрать который под силу каждому, кто обладает начальными навыками обращения с базовым набором инструментов. Комплекты Qünell позволяют оформить откосы по внешнему и внутреннему периметру.

Они состоят из нескольких соединяемых друг с другом в один клик элементов:

Наличник – декоративный элемент для отделки внешней стороны откосов. Он позволяет без особых усилий замаскировать все имеющиеся дефекты, оставшиеся после первичной отделки стен. Наличники сконструированы таким образом, что могут применяться как с откосными панелями, так и без них. Они фиксируются между собой при помощи специальных крышек или путем традиционной угловой зарезки.

Панель откоса – формирующий систему основной элемент, имеющий два типа замков. При помощи первого бокового соединения осуществляется состыковка с наличником по периметру окна, а второго – фиксация самих откосных панелей.

Стартовый профиль — специальная планка, при помощи которой панели откоса «привязываются» к дверной коробке или оконной раме. Специальный «клюв» стартового профиля системы Qünell исключает вероятность возникновения щелей и зазоров между проемами и этими соединительными планками.

Защелка – скрытая деталь конструкции, предназначенная для фиксации наличников, угловых крышек и откосных панелей.

Угловая крышка – декоративный соединительный элемент для точного и эстетичного соединения вертикальных и горизонтальных наличников. Применение этих деталей обеспечивает идеальное прилегание декоративных элементов для облицовки внешней стороны откоса.

Профильный погонаж и соединительные элементы всех модификаций откосных систем Qünell изготовлены на основе поливинилхлорида с добавлением мела, термостабилизаторов, пластификаторов, а также пигментируемых добавок. Полученный в результате прочный материал имеет незначительный вес, не индуцирует посторонних запахов и не деформируется в процессе эксплуатации. Безопасность для здоровья и возможность применения в медицинских и учебных заведениях подтвердил после соответствующих испытаний «Научно-практический центр гигиены» Республики Беларусь.

Преимущества откосных систем Qünell

Применение откосов Qünell позволяет не только облагородить оконные и дверные проемы, но и утеплить их. Эти системы эффективно препятствуют промерзанию, а также не позволяют накапливаться конденсату, который моментально отводится по внутренним каналам. Для монтажа одного стандартного проема опытному специалисту понадобится не больше часа, при этом в процессе установки панели можно разворачивать по отношению к оконным рамам либо погонажным элементам дверных коробок даже под углом 125°.

Системы Qünell прошли полный цикл успешных испытаний, определивших цветоустойчивость при воздействии UF-лучей. Эти панели не меняют линейных размеров при высоких и низких температурах. Экспериментальным путем было определено, что отделочный материал из ПВХ с добавлением пластификаторов относится к группе малоопасных веществ с маркировкой T1 . Откосы Qünell не боятся влаги и в случае необходимости могут быть демонтированы и заново установлены на другом объекте.

Цветовые и декоративные решения систем Qünell

Панели, откосы и соединительные элементы, из которых набирается откосная система Qünell, могут иметь свыше 2000 цветов с оттенками по шкале RAL. На выбор потребителю предлагаются однотонные, древоподобные и фантазийные декоры. Разработана и производится специальная серия для детских комнат, а также панели с декоративным оформлением в стилях «Гжель», «Прованс», «Восточный» или «Экстерьер».

Благодаря такому разнообразию цветовых решений не составит труда подобрать максимально подходящую систему Qünell под любой тип внутренней или внешней отделки.

Эксплуатация окон Уход за окнами Дизайн окон Отделка окна

Откосные системы «Qunell» — «STARPROM INOVATION»

В нашей компании Вы можете купить откосные системы «Qunell» от производителя по доступной цене.
Пластиковые откосы «Qunell» — это самое оптимальное решение отделки оконных и дверных откосов.
Мы предлагаем Вам закупку откосной системы «Qünell» готовыми комплектами в фирменной упаковке.
Каждый комплект имеет свои параметры, благодаря которым предоставляется возможность установить откосы «Qunell» на любой размер проема.

ТАБЛИЦА ТИПОРАЗМЕРОВ

Маркировка Ka XX-YY, где:
К – комплект;
а – глубина панели откоса, 2-3-4-6 соответственно 200-300-400-600мм;
XX — размер дверного или оконного проёма по вертикали, дециметр;
YY — размер дверного или оконного проёма по горизонтали, дециметр.

Во все комплекты (кроме размера 18-22, 22-22 и 23-23) входят три панели откоса, три стартовых профиля, три наличника,15 защёлок и 2 крышки угловые, а в комплекты 18-22, 22-22 и 23-23 входят 20 защёлок.

КОМПЛЕКТ К200
Комплект откосной системы Кюнель, К200 15-15
Комплект откосной системы Кюнель, К200 15-18
Комплект откосной системы Кюнель, К200 15-22
Комплект откосной системы Кюнель, К200 18-18
Комплект откосной системы Кюнель, К200 18-22
Комплект откосной системы Кюнель, К200 22-10
Комплект откосной системы Кюнель, К200 22-22
Комплект откосной системы Кюнель, К200 23-23

КОМПЛЕКТ К300
Комплект откосной системы Кюнель, К300 15-15
Комплект откосной системы Кюнель, К300 15-18
Комплект откосной системы Кюнель, К300 15-22
Комплект откосной системы Кюнель, К300 18-18
Комплект откосной системы Кюнель, К300 18-22
Комплект откосной системы Кюнель, К300 22-10
Комплект откосной системы Кюнель, К300 22-22
Комплект откосной системы Кюнель, К300 23-23

КОМПЛЕКТ К400
Комплект откосной системы Кюнель, К400 15-15
Комплект откосной системы Кюнель, К400 15-18
Комплект откосной системы Кюнель, К400 15-22
Комплект откосной системы Кюнель, К400 18-18
Комплект откосной системы Кюнель, К400 18-22
Комплект откосной системы Кюнель, К400 22-10
Комплект откосной системы Кюнель, К400 22-22
Комплект откосной системы Кюнель, К400 23-23

КОМПЛЕКТ К600
Комплект откосной системы Кюнель, К600 15-15
Комплект откосной системы Кюнель, К600 15-18
Комплект откосной системы Кюнель, К600 15-22
Комплект откосной системы Кюнель, К600 18-18
Комплект откосной системы Кюнель, К600 18-22
Комплект откосной системы Кюнель, К600 22-10
Комплект откосной системы Кюнель, К600 22-22
Комплект откосной системы Кюнель, К600 23-23

ДИЗАЙН ОТКОСОВ QÜNELL

Откосная система Qünell не только отлично справляется с функциональными задачами, но и делает интерьер красивым и завершенным. Важно, что элементы откосной системы Qünell легко поддаются ламинированию (нанесению декоративной пленки) и колорированию. Эти откосы могут использоваться для обрамления как оконных, так и дверных проемов. Все элементы конструкции тщательно подогнаны один под другой уже на производстве, мастеру лишь останется собрать все элементы воедино, а Вам – наслаждаться своими новыми откосами. Откосы Qünell настолько хороши, что Вам, возможно, даже не захочется декорировать свои окна шторами. Выбирайте свои декоративные откосы Qünell и создавайте интерьер, который радует глаз! Откосная система окрашивается по каталогу RAL. Qünell – доступная роскошь в каждый дом!

ПРЕИМУЩЕСТВА СИСТЕМЫ QUNELL ПЕРЕД ОТКОСАМИ ДРУГИХ ВИДОВ

Срок службы более 30 лет!
Монтаж одного комплекта за 2 часа!
НЕТ!!!-трещинам, грибку, промерзанию, испорченному виду!
Стиль дизайна-итальянская классика. Любой цвет. Варианты декора: ламинация, окрашивание, уф-печать.

В поиске простых и правильных решений для отделки откосов

Каждый, кто сталкивался с ремонтом, знает, что установленное окно – это еще не повод для радости. Впечатление от сияющего новизной окна может всерьез испортить «обрамление» в виде разрушенных или неотделанных проемов. Как придать окну законченный и эстетичный вид? Здесь есть несколько вариантов. Рассмотрим различные варианты отделки откосов и разберемся, в чем состоят их преимущества и недостатки.

Откосная система Qünell: щелк – и готово

Современная откосная система Qünell (Кюнель) – совместная разработка ведущих белорусских и австрийских инженеров, обладает рядом преимуществ. Это, прежде всего, система, которая включает специально разработанные комплектующие для отделки откосов, необходимые для быстрого и качественного монтажа конструкции.

В отличие от обычного пластикового откоса откосная система Qünell легко демонтировать и установить заново, так как они крепятся не на клей, а на специальные защелки. Это удобно, если, например, нужно переклеить обои или перекрасить стены. Благодаря инновационной технологии процесс установки откосной системы требует минимум времени – отделочнику будет достаточно около часа для установки откосной системы Qünell на одно стандартное окно.

Кроме того, откосные системы Qünell прочные, легко очищаются, устойчивы к воздействию ультрафиолетовых лучей. Откосные системы изготавливаются из высококачественных материалов, в различных цветовых и дизайнерских решениях.

Дерево: красиво и экологично, но подходит не всем

Начнем с не самого популярного способа отделки – дерева. Безусловно, материал обладает такими важными свойствами, как экологичность и отличный внешний вид. Но для качественных откосов потребуется очень качественное деревянное полотно – такое, что не рассохнется, не деформируется и так далее.

Соответственно, цена такого решения будет достаточно высокой. Помимо этого, следует обратить внимание на то, что деревянный откос впишется далеко не в каждый интерьер: например, в обычной квартире с пластиковыми окнами он будет выглядеть не совсем уместно. Но для деревянного дома с деревянными окнами есть смысл рассмотреть этот вариант.

Штукатурные откосы: дешево и сердито

Отделка откосов штукатуркой – это классический способ, известный с незапамятных времен. И пусть строительная мысль шагнула далеко вперед, «старая добрая» штукатурка все еще находит себе применение. Почему? Это, пожалуй, самый дешевый вариант, который хорош еще тем, что он применим и для внутренней, и для внешней отделки. В руках умелого мастера штукатурная смесь превратится в ровное и гладкое покрытие, которое останется только выкрасить в нужный цвет.

И все бы хорошо, но есть и явные недостатки такого решения. Для начала отметим, что на отделку штукатуркой понадобится немало времени – до 3-5 дней. Если соблюдать технологию, надо накладывать смесь слоями, дождавшись высыхания предыдущего слоя, а иначе откосы со временем покроются трещинами. Рано или поздно можно обнаружить другое неприятное явление – отслоение откоса, поскольку штукатурка не образует прочное соединение с ПВХ-окном. В холодное время года проем переохлаждается, что приводит к выпадению конденсата, а в дальнейшем – к появлению плесени и грибка. Ну и последнее, на чем следует заострить внимание: к сожалению, при неаккуратных действиях штукатурной смесью можно испачкать само окно, подоконник или фурнитуру, после чего восстановить первоначальный безупречный внешний вид получается не всегда: остаются пятна или царапины.

Гипсокартон: теплее, но сложнее

Этот вариант более дорогой по сравнению со штукатуркой. По наблюдениям специалистов, зачастую в месте стыковки откоса с окном образуются микротрещины, что вполне объяснимо – пластиковый профиль с понижением температуры сужается, а гипсокартон сохраняет свою форму. Сама технология установки откосов из гипсокартона считается сложной и требующей много времени: необходимо надежно закрепить плиту, затем качественно обработать оконный проем грунтовкой, специальными смесями и покрасить.

Важно упомянуть, что при длительном намокании гипсокартон может вздуться, поэтому его применение для наружных откосов невозможно. В целом, гипсокартонные откосы смотрятся так же неплохо, как и штукатурные, у них есть ряд преимуществ перед ними, но есть и свои недостатки.

Пластиковые сэндвич-панели: шаг к прогрессу

На смену более традиционным решениям пришли откосы из сэндвич-панелей ПВХ, которые часто называют «теплыми». Сэндвич-панели представляют собой конструкцию из трех слоев: двух внешних из твердого ПВХ, между которыми – плита из экструдированного пенополистирола. Это делает их влагостойкими и достаточно прочными. Проблем с выпадением конденсата не возникает.

Откосы из сэндвич-панелей выглядят вполне неплохо, если не поскупиться и выбрать качественные материалы в достаточно дорогом ценовом сегменте. Но надо учитывать, что это всего лишь панели, а для стыковки и отделки потребуется подобрать профили от других систем, что в целом отрицательно сказывается на эстетичности внешнего вида. Более дешевый пластик выглядит соответственно своей цене, он со временем выгорает на солнце и теряет свой цвет. При возникновении необходимости проведения ремонтных работ (повреждение самого откоса, переклейка обоев и т.п.) откосы из сэндвич-панелей придется заменить, восстановлению они не подлежат. Технология установки откосов из сэндвич-панелей имеет свои сложности, поэтому к этому процессу стоит привлечь профессионалов.

Пластиковые откосы: собери окно сам

Выбор пластика для отделки откосов вполне логичен: этот материал хорошо сочетается с пластиковыми окнами. В пользу пластиковой отделки откосов говорит и сравнительно невысокая цена. Но здесь, как и в случае с сэндвич-панелями, нужно иметь в виду, что дешевый материал со временем может изменить цвет, деформироваться, и в результате оконный проем потеряет первоначальный внешний вид. Как и в случае с откосами из сэндвич-панелей, если возникнет необходимость ремонта (повреждение самого откоса, переклейка обоев и т.п.), то откосы из пластика придется заменить, восстановлению они не подлежат. Также при отделке проема пластиковыми профилями важно тщательно подобрать все элементы конструкции, аккуратно обработать стыки – только в этом случае можно добиться приемлемого внешнего вида.

Итак, при выборе откосов обратите внимание на следующие моменты:

Основные роли ДНК-полимераз, эпсилон и дельта в вилке репликации эукариот, эволюционно консервативны

Abstract

Скоординированная репликация эукариотических геномов по своей природе асимметрична, с непрерывным синтезом ведущей цепи, предшествующим прерывистому синтезу отстающей цепи. Здесь мы приводим два типа свидетельств, указывающих на то, что у делящихся дрожжей эти две биосинтетические задачи выполняются двумя разными репликазами. Во-первых, в штаммах Schizosaccharomyces pombe , кодирующих мутаторный аллель polδ-L591M , замены оснований в репортерных генах, расположенных в противоположных ориентациях относительно хорошо охарактеризованного ориджина репликации, специфичны для цепи и распределены по образцам, предполагающим, что Polδ в первую очередь участвует в репликация отстающей цепи.Во-вторых, в штаммах, кодирующих аллель polε-M630F и лишенных способности восстанавливать rNMPs в ДНК из-за дефекта в RNase h3, rNMPs выборочно наблюдаются в формирующейся ведущей цепи ДНК. Последнее наблюдение демонстрирует, что обильное включение rNMP во время репликации допустимо и что они обычно удаляются зависимым от РНКазы h3 образом. Это дает убедительные физические доказательства того, что Polε является первичной репликазой ведущей цепи. В совокупности эти данные и более ранние результаты прорастающих дрожжей указывают на то, что основные роли Polδ и Polε в вилке репликации эукариот эволюционно законсервированы.

Сведения об авторе

Важно понимать архитектуру механизма репликации ДНК и то, является ли она общим для всех организмов. Недавняя работа в Saccharomyces cerevisiae генетически отнесла специфические ДНК-полимеразы к синтезу ДНК с ведущей и отстающей цепью, Polε и Polε соответственно. В этой рукописи мы используем аналогичный генетический анализ, чтобы продемонстрировать, что в сильно эволюционно дивергированных дрожжах Schizosaccharomyces pombe Polδ аналогичным образом ответственен за синтез отстающей цепи.Важно отметить, что мы создали новый физический анализ, включение rNMPs во вновь реплицированную ДНК, который демонстрирует, что Polε отвечает за синтез ведущей цепи и не вносит значительного вклада в репликацию отстающей цепи. Эти данные решительно подтверждают и объединяют интерпретацию предыдущих генетических данных и предполагают, что разделение труда между полимеразами сохраняется в процессе эволюции.

Образец цитирования: Miyabe I, Kunkel TA, Carr AM (2011) Основные роли ДНК-полимераз, эпсилон и дельта в вилке репликации эукариот, эволюционно сохранены.PLoS Genet 7 (12): e1002407. https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407

Редактор: Грегори П. Копенгейвер, Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл, США

Поступила: 8 июля 2011 г .; Одобрена: 20 октября 2011 г .; Опубликовано: 1 декабря 2011 г.

Это статья в открытом доступе, свободная от всех авторских прав, и ее можно свободно воспроизводить, распространять, передавать, изменять, строить или иным образом использовать в любых законных целях.Работа сделана доступной по лицензии Creative Commons CC0 как общественное достояние.

Финансирование: Эта работа была поддержана проектом Z01 ES065070 для TAK из отдела внутренних исследований NIH и грантом G0801078 MRC для AMC. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Три ДНК-полимеразы, Polα, Polδ и Polε, необходимы для эффективной репликации генома у эукариот [1], [2].Холоферментный комплекс Polα обладает как примазной активностью, так и активностью ДНК-полимеразы и необходим для инициирования каждой реакции синтеза ДНК. Субъединица примазы сначала синтезирует короткий праймер РНК из ~ 10 нуклеотидов, а субъединица ДНК-полимеразы затем удлиняет этот праймер, используя дНТФ, еще на 20-30 нуклеотидов, тем самым инициируя репликацию ДНК. Polδ или Polε затем заменяют Polα и выполняют основную репликацию ДНК, удлиняя эти праймеры.

Геномная ДНК точно реплицируется в течение каждого клеточного цикла с частотой ошибок приблизительно 1 из 10 ⁻¹⁰ ошибок на пару оснований, гарантируя, что генетический план передается в значительной степени без изменений из поколения в поколение. В эукариотических клетках репликация ДНК инициируется двунаправленно из многих источников репликации. Из-за антипараллельной структуры ДНК одна цепь (ведущая цепь) непрерывно реплицируется в том же направлении репликационной вилки, в то время как вторая цепь (запаздывающая цепь) синтезируется прерывисто в направлении, противоположном направлению развития репликационной вилки. Относительно небольшие (200–1000 оснований) участки ДНК, синтезируемые во время репликации отстающей цепи, известны как фрагменты Окадзаки и быстро обрабатываются и лигируются для завершения репликации отстающей цепи.Точность репликации обеспечивается нуклеотидной селективностью репликаз для достижения частоты ошибок 10 ^-4-10 ^-5, экзонуклеолитической проверкой во время репликации для увеличения точности примерно в 100 раз и пострепликационной репарацией ошибочного спаривания ДНК. для дальнейшего повышения точности и снижения частоты мутаций до 10 ^-8 -10 ^-10 [3].

Polα, Polδ и Polε все принадлежат к семейству ДНК-полимераз B. Структура активного центра ДНК-полимераз семейства B очень консервативна на протяжении всей эволюции.Что касается большинства полимераз, точная геометрия активного сайта полимеразы гарантирует, что несоответствия в значительной степени исключены для включения [4]. Важность геометрии активного сайта полимеразы для точности репликации иллюстрируется тем фактом, что замены консервативных остатков активного сайта часто снижают точность синтеза ДНК. Актуальными для настоящего исследования являются замены в Saccharomyces cerevisiae Polε и Polδ (M644G и L612M, соответственно), которые увеличивают частоту ошибок при синтезе ДНК in vitro , а также приводят к повышению частоты спонтанных мутаций in vivo [5] — [ 8].Эти полимеразы имеют особую ценность для исследований верности репликации in vivo , поскольку их частота ошибок предпочтительно повышается только для одного из двух возможных несовпадений, которые могут привести к замене определенного основания в клетке. Например, Polδ L612M преимущественно генерирует T-dGTP, а не ошибки A-dCTP, и это предпочтение приводит к специфическим для цепи мутациям от A – T к G – C во время дуплексной репликации ДНК in vivo . Эти смещенные коэффициенты ошибок приводят к асимметричным профилям мутаций в репортерном гене URA3 , который реплицируется только в одном направлении из-за его непосредственной близости к активному источнику.При наличии в каждой из двух возможных ориентаций URA3 относительно происхождения мутационные паттерны, наблюдаемые в штаммах, несущих мутаторные аллели pol2-M644G (polε) и pol3-L612M (polδ), подразумевают, что S. cerevisiae Polε и Polδ представляют собой репликазу первичной ведущей цепи и отстающей цепи соответственно [9], [10].

Целью настоящего исследования является определение основных ведущих и отстающих реплик в делящихся дрожжах Schizosaccharomyces pombe .Для исследования Polδ мы использовали тот факт, что как S. cerevisiae Polδ L612M [6], так и его человеческий эквивалент, Polδ L606M [11], [12], как было показано, влияют на точность синтеза ДНК. Здесь мы сообщаем, что Schizo. pombe Polδ L591M генерирует асимметричные профили мутаций in vivo , которые согласуются с Polδ, являющимся первичной репликазой отстающей цепи в Schizo. pombe . Чтобы исследовать Polε, мы попытались создать Schizo. pombe Polε ( polε-M630G ), эквивалентная мутации, ранее изученной в S.cerevisiae (кодирует Polε M644G). Schizo. pombe с этой заменой оказались нежизнеспособными. Поэтому мы создали другой аллель, polε-M630F , потому что замена фенилаланином на эквивалентных остатках активного сайта в S. cerevisiae Polα [13] и Polζ [14] является жизнеспособной и имеет повышенную частоту спонтанных мутаций. Мы показываем здесь, что Schizo. pombe polε-M630F аллель также является жизнеспособным и является спонтанным мутатором. Хотя он не показал подходящий профиль асимметричной мутации для назначения цепи, мы смогли использовать второй параметр неверности для назначения цепи, склонность к включению rNMP в ДНК.Предыдущие исследования показали, что во время синтеза ДНК in vitro и in vivo , S. cerevisiae Polε M644G включает большее количество rNTPs в ДНК, чем Polε дикого типа [15], [16]. Здесь мы используем ту же неразборчивость в отношениях с Schizo. pombe polε-M630F , чтобы обеспечить физическую демонстрацию того, что большая часть синтеза ведущей цепи в Schizo. pombe выполняется Polε.

Результаты

Подход

Какая ДНК-полимераза реплицирует, какую цепь какая цепь была определена только у почкующихся дрожжей S.cerevisiae [9], [10]. Таким образом, мы хотели определить, сохраняется ли это разделение труда между основными репликативными полимеразами у отдаленно родственного эукариота, делящихся дрожжей Schizo. pombe . Наша стратегия заключалась в том, чтобы установить направление репликации для определенного локуса, создать мутанты в генах, кодирующих две репликативные полимеразы, Polδ и Polε, которые демонстрируют специфические и характерные профили неправильного включения, и использовать их для отнесения каждой полимеразы к одному или другая цепь (или обе) на основе профиля неправильного включения в направленно реплицированных локусах.

Каталитические субъединицы Polδ или Polε кодируются генами cdc6 ( pol3 ) и cdc20 ( pol2 ) соответственно. Для ясности здесь мы называем их просто polδ и polε . Мы использовали опосредованную рекомбинацией замену кассет (RMCE) для создания штаммов, содержащих каждую конкретную мутантную полимеразу [17]. Мутантные гены, введенные в геном этим методом, фланкированы последовательностями lox (P и M3). Таким образом, мы также создали контрольные штаммы ( pol ⁺ ), которые имеют ген, кодирующий полимеразу дикого типа, фланкированный теми же сайтами lox.

Направление репликации ДНК в локусе

ura4

Шизо . Ген pombe ura4 ⁺ допускает как положительный, так и отрицательный отбор. Отбор на потерю функции ura4 достигается путем роста на среде, содержащей 5-фтороротовую кислоту (5-FOA), что позволяет идентифицировать мутанты с потерей функции. Однако мутации в генах ura4 или ura5 Schizo. pombe придают устойчивость к 5-FOA, и сообщалось, что более 50% спонтанно возникающих клонов, устойчивых к 5-FOA, несут мутации в ura5 [18].В клетках дикого типа ura4 ⁺ находится на хромосоме III, а ura5 ⁺ находится на хромосоме II. Поэтому, чтобы эффективно идентифицировать мутации в одном месте хромосомы, которые придают устойчивость к 5-FOA, мы создали два искусственных локуса, в которых ura5 ⁺ были размещены рядом с ura4 ⁺ на хромосоме III. Они отличаются только ориентацией фрагмента ura4 ⁺ : ura5 ⁺ (рис. 1A).Мы подтвердили, что этот новый фрагмент ura5 ⁺ : ura4 ⁺ не функционирует как ориджин репликации, продемонстрировав, что он не поддерживает поддержание последовательности плазмиды в клетках. Мы также удалили геномный ген ura5 ⁺ на хромосоме II, так что полученные штаммы ura4 ⁺: ura5 ⁺ Δura5 имеют только одну копию ura4 ⁺ и ura5 ⁺. генов.

Рисунок 1. Polδ L591M демонстрирует смещение мутагенной цепи.

A. Схема локуса ura4 ⁺ дикого типа и двух версий модифицированного локуса ura4 ⁺: ura5 ⁺ . Вперед: транскрибируемая цепь ura4 и ura5 соответствует отстающей цепи при репликации из ars3003 / 3004 . Реверс: ориентация последовательностей ura4: ura5 изменена таким образом, что транскрибируемая цепь соответствует ведущей цепи при репликации из ars3003 / 3004 .Потеря функции ura4 или ura5 приводит к сопротивлению 5-FOA. Б. Направление репликации по модифицированному локусу ura4 ⁺. Вверху: Схема локуса ura4 ⁺: ura5 ⁺. Внизу: принцип направленного 2D-гель-анализа. Асимметричное расщепление фрагмента Hind III- Blp I с Spe I между прохождением первого и второго измерений приведет к смещению Y-дуги.Положение дуги Y указано стрелкой. Направление сдвига зависит от направления репликации. C. Сравнение промежуточных продуктов репликации в области Hind III- Blp I либо без (непереваренной), либо после переваривания Spe I между измерениями ( Spe I). Сдвинутая дуга Y после расщепления Spe I обозначена красной стрелкой, эквивалент которой также показан в верхней рамке панели B. Большинство репликационных вилок работают справа налево, что соответствует эффективному инициированию с . ars3003 / ars3004 справа.D. Рост клеток дикого типа, polδ ⁺ ( polδ дикого типа, фланкированных сайтами lox) и polδ-L591M . Серийные разведения клеток наносили на планшеты YEA, инкубировали (30 ° C) в течение 2 или 4 дней и фотографировали. E. Частота спонтанных мутаций в каждом из указанных фонов для polδ ⁺ и polδ-L591M . Планки погрешностей показывают стандартное отклонение.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.g001

Локус ura4 ⁺ : ura5 ⁺ находится на хромосоме III, рядом с двумя автономными реплицирующимися последовательностями; арс3003 / 3004 .Последовательности ars3003 и ars3004 хорошо охарактеризованы и известны своей высокой эффективностью при инициации репликации [19], [20]. Однако более 50% из Schizo. pombe межгенные области обладают потенциалом функционировать как источники репликации [21]. Таким образом, для экспериментального определения направления репликации ДНК в локусе ura4 ⁺: ura5 ⁺ был использован метод направленного 2-D гель-электрофореза [22].ДНК из асинхронной популяции клеток сначала расщепляется с помощью Hind III и Blp I, и фрагменты разделяются в первом измерении без бромистого этидия. Затем полосу вырезают и расщепляют Spe I, который расщепляет фрагмент Hind III- Blp I, содержащий гены ura4 ⁺ и ura5 ⁺ . Затем эту ДНК подвергают второму измерению электрофореза в присутствии бромистого этидия, и ДНК в геле переносят на мембрану для саузерн-блот-анализа с ura4-содержащим фрагментом Hind III- Spe I.Результаты показали направление репликации ДНК, как показано на рисунке 1B. Большинство обнаруживаемых промежуточных продуктов репликации демонстрируют образец, соответствующий репликации ДНК, движущейся справа налево (рисунок 1C, см. Нижнюю панель с красной стрелкой: его эквивалент аналогичным образом указан на верхней панели рисунка 1B). Таким образом, мы заключаем, что левая репликационная вилка реплицирует локус ura4 ⁺: ura5 ⁺ в большинстве клеток.

Характеристика мутанта

polδ-L591M

Затем мы создали мутант polδ-L591M с использованием RMCE. Schizo. pombe Polδ L591 эквивалентен S. cerevisiae Polδ L612. polδ-L591M клетки растут так же, как клетки дикого типа (рис. 1D), демонстрируя, что этот мутант Polδ является опытным для репликации ДНК in vivo . В фонах дикого типа и ura4 ⁺: ura5 ⁺ Δura5 , polδ-L591M продемонстрировал сильный мутаторный фенотип (рис. 1E). Частота спонтанных мутаций повышена примерно в 100 раз в polδ-L591M (4–5 × 10 ⁻⁶ / деление клетки) по сравнению с таковой в polδ ⁺ (4–7 × 10 ⁻⁸).

Мутационное смещение в штаммах

polδ L591M

Повышенная частота мутаций указывает на то, что большинство мутаций, наблюдаемых в клетках polδ -L591M , отражают специфичность ошибок этой мутантной полимеразы, а не фоновые мутации. Как показано в Таблице 1, более половины мутаций были точечными, что согласуется с повышенной ошибочной инкорпорацией оснований, наблюдаемой in vivo для эквивалентного штамма S. cerevisiae и in vitro для соответствующей мутантной версии (L612M) S. .cerevisiae Polδ [5], [6], [23] и человеческий (L606M) Polδ [11], [12]. Помимо точечных мутаций, мы наблюдали множество дупликационных и делеционных мутаций. Все эти делеции и дупликации наблюдались в повторяющихся последовательностях ДНК. Более половины делеций были> 100 п.н., в то время как большинство дупликаций были <100 п.н. (Таблица S1). Возможные механизмы, с помощью которых могут возникать такие мутации, рассматриваются в Обсуждении.

Среди точечных мутаций переходные мутации показали значительную зависимость цепи от неправильного включения.На рис. 2 и в таблице 2 показаны предсказанные неправильные пары, образующиеся во время синтеза транскрибируемой цепи, что соответствует синтезу отстающей или ведущей цепи в прямом или обратном штаммах, соответственно (проиллюстрировано на рис. 2А). Мутации A: T в G: C могут быть результатом либо несовпадений A: dCTP, либо несовпадений T: dGTP. В зависимости от того, какая матричная цепь копируется мутированной полимеразой, это приведет к смещению мутации, в результате чего спектр будет зависеть от ориентации последовательности ДНК (см. Рисунок 2B).Мы наблюдали, что для изменений A: T в G: C ошибочное спаривание T: dG в 12,5 раз чаще, чем неправильное спаривание A: dC в прямой штамме, в то время как A: dC чаще встречается в обратной штамме. Поскольку частота неправильного включения соответствующего мутанта S. cerevisiae и человеческих полимераз намного выше для T: dG, чем для A: dC [6], [12], результаты на рисунке 2 подразумевают, что Polδ преимущественно реплицирует шаблон отстающей цепи. . Подобная систематическая ошибка наблюдалась также для мутаций от G: C до A: G. G: dT примерно в 3 раза выше, чем C: dA в прямой деформации, в то время как C: dA примерно в 3 раза выше в обратной деформации.Сравнение этих данных с опубликованными результатами in vitro также согласуется с тем, что Polδ отвечает за репликацию матрицы отстающей цепи. Зависимость от цепей не наблюдалась в клетках polδ ⁺ (таблица 3), что указывает на то, что систематическая ошибка, наблюдаемая в клетках polδ -L591M , отражает неправильное включение оснований мутантной полимеразой, а не контекст последовательности или направление транскрипции маркерных генов. Мы не наблюдали сильных горячих точек для определенных мутаций, но общее количество появлений выше для некоторых мутаций, например.g., от Т до С на ура4 пары оснований 236 и 76 на прямом фоне и от С до Т на ура4, 190 и (-91) на обратном фоне (рис. 3).

Рис. 2. Смещение цепи для polδ-L591M .

A. Схема репликации через локусы прямого и обратного ura4 ⁺ : ura5 ⁺ . Синтез ведущей цепи показан красным, синтез запаздывающей цепи показан зеленым. Транскрибированная нить показана синим для справки.B. Вверху: относительное количество идентифицированных мутаций AT> GC и GC> AT, классифицированных как результат неправильного спаривания A: dC или T: dG (AT> GC) и неправильного спаривания G: dT или C: dA (GC> AT). . Нижний. Схематическая иллюстрация репликации конкретной пары оснований A: T в обеих ориентациях. Если полимераза отстающей цепи, но не полимераза ведущей цепи, склонна к неправильному спариванию dG напротив T во время включения, но не dC напротив A, то эта пара оснований A: T будет мутировать в G: C чаще в прямой ориентации, чем обратная ориентация.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.g002

Рисунок 3. Спектры мутаций.

A. ura4 и B. ura5 . Показаны промоторная область ura5 (нижний регистр) и ORF как rad4 , так и ura5 (верхний регистр). Указывается положение каждой картированной мутации. Мутации, возникающие на «прямом» фоне (транскрибируемая цепь, реплицируемая путем синтеза отстающей цепи) показаны над последовательностью, тогда как мутации, возникающие на «обратном» фоне (транскрибированная цепь, реплицируемая путем синтеза ведущей цепи), показаны под последовательностью.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.g003

Характеристика мутанта

polε-M630F

S. cerevisiae Polε M644G демонстрирует сильное смещение между ошибочными парами A: dA и T: dT in vitro , а частота спонтанных мутаций соответствующих мутантных клеток значительно выше, чем у клеток дикого типа, и демонстрирует смещение цепи [8]. Однако мы обнаружили, что эквивалент Schizo. pombe polε-M630G мутация является летальной, как и мутация polε-M630K .Анализ штаммов, экспрессирующих Polε M630G или Polε-M630K из эктопической интегрированной копии на фоне pol ε ⁺ (рисунок S1), предполагает, что это в значительной степени связано с каталитической неактивностью, поскольку частота мутаций не была резко увеличена. Таким образом, мы создали штаммы, содержащие в качестве альтернативы polε-M630F . Решение о замене фенилаланином было основано на более ранних исследованиях, показывающих, что Polα L868F подвержен ошибкам in vitro и мутаген in vivo [13], Polε M644F подвержен ошибкам in vitro со слабой систематической погрешностью [7] , а Polζ L979F подвержен ошибкам in vitro [24] и мутагенным in vivo [14]. Schizo. pombe polε-M630F , который мы создали с использованием методологии RMCE, растет немного медленнее, чем polε ⁺ , хотя размер мутантных колоний становится сопоставим с размером колоний дикого типа после продолжительной инкубации (рис. 4A). Штаммы, содержащие polε-M630F , не демонстрировали существенного увеличения скорости спонтанных мутаций на фоне опытной репарации ошибочного спаривания. В штаммах, в которых репарация ошибочного спаривания инактивируется путем делеции гена msh3 , polε-M630F увеличивает частоту мутаций в 4–5 раз (рис. 4C).Однако при секвенировании ura5 и ura4 из устойчивых к 5-FOA клонов смещения цепи, достаточного для того, чтобы сделать вывод, какая цепь копируется мутантным Polε, не наблюдалось (таблица S2).

Рисунок 4. Скорость мутации и включение dNMP с помощью polε-M630F .

A. Рост клеток дикого типа и штаммов polε ⁺ ( polε дикого типа, фланкированных lox сайтами) и polε-M630F . Серийные разведения клеток наносили на планшеты YEA, инкубировали (30 ° C) в течение 2 или 3 дней и фотографировали.Б. Схема локуса ura4 ⁺ дикого типа и двух версий модифицированного локуса ura4 ⁺: ura5 ⁺ . C. Частота спонтанных мутаций для polε ⁺ , msh3 Δ, polε-M630F и polε-M630F msh3 Δ двойных мутантных клеток в ura4 ⁺ (дикий тип), прямой и обратный фоны. Планки погрешностей — стандартные отклонения.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pgen.1002407.g004

Включение rNMP в ДНК с помощью Polε M630F

Мутации Polε M644 в S. cerevisiae влияют на скорость включения rNMP в ДНК [15]. Таким образом, мы проверили эту возможность в Schizo. pombe . rNMPs, включенные в ДНК, быстро вырезаются под действием РНКазы h3, каталитическая субъединица которой кодируется геном rnh301 из Schizo. pombe . Поскольку повышенное включение rNMP увеличивает щелочно-зависимую фрагментацию ДНК, мы проанализировали увеличенную гелевую подвижность ДНК из эндогенного локуса ura4 ⁺, используя Саузерн-блот-анализ.Как и ожидалось, геномная ДНК, полученная из polε-M630F , не была особенно чувствительна к обработке щелочью по сравнению с геномной ДНК из штамма polε ⁺ (фиг. 5A, дорожки 1 и 2). Однако он становится значительно чувствительным по сравнению с polε ⁺ , когда удаляется rnh301 (дорожки 3 и 4). Это указывает на то, что Polε M630F включает rNMP в ДНК с большей скоростью, чем Polε дикого типа, и что они в значительной степени удаляются с помощью активности РНКазы h3.

Рисунок 5. Смещение цепи для включения rNMP.

A. Щелочная чувствительность геномной ДНК. Геномную ДНК указанных штаммов либо переваривали с помощью Eco RI, либо оставляли непереваренной, затем обрабатывали щелочью и разделяли электрофорезом в щелочном агарозном геле. ДНК выявляли с помощью бромистого этидия после нейтрализации, а затем обрабатывали для анализа по Саузерну и зондировали зондом ura4 , который выявляет обе цепи ДНК. B. Схема локусов по обе стороны от ars3003 / 3004 , указывающая положения сайтов Eco RI, а также расположение и специфичность цепи используемых зондов.C. Чувствительность к щелочам каждой нити, либо слева от ars3003 / 3004 (зонды A и B), либо справа (зонды C и D). Штаммы были либо polε ⁺ (+), либо pol ε -M630F (-) с или без сопутствующей делеции rnh301 , как указано. Мембрану, показанную на Фигуре 3D, сняли и гибридизовали с указанными одноцепочечными зондами. Зонд A и C гибридизуются с верхней цепью, зонды B и D гибридизуются с нижней цепью.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.g005

Основываясь на этом наблюдении, мы решили проверить специфичность цепи включения rNMP с использованием щелочной обработки и последующего зондирования ведущей или отстающей цепи с использованием подходящей одноцепочечные зонды. Мы подготовили две пары зондов для ars3003 / 3004 (рисунок 5B). Верхняя цепь детектируется зондами A и C, а нижняя цепь детектируется зондами B и D. Как показано на рисунке 5C, только одна из двух нитей из rnh301Δ polε-M630F была чувствительна к щелочу в каждой исследовал сайт.Чувствительная нить к щелочам была нижней нитью на левой стороне источника, а верхняя — с правой стороны (рис. 5B и 5C). Поскольку предполагается, что эти зондируемые сайты копируются репликационными вилками, появившимися на ars3003 / 3004 , чувствительные к щелочам цепи соответствуют возникающим ведущим цепям продуктов репликации. Аналогичные результаты были получены в другом источнике (рис. S2). Эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что Polε реплицирует матрицу ведущей цепи.

Обсуждение

Понимание фундаментального механизма репликации ДНК — важный аспект понимания того, как репликация и ошибки, сделанные во время репликации, влияют на эволюцию и болезни человека.Хотя у нас есть обширные знания о белках, участвующих в репликации эукариотической ДНК, в том числе о тех, которые перемещаются вместе с активной реплисомой, у нас нет однозначного представления об архитектуре самой репликационной машины. В самом деле, только недавно генетические данные по почкующимся дрожжам S. cerevisiae связали ключевые репликативные полимеразы Polε и Polδ с синтезом ведущей и отстающей цепи, соответственно. Хотя эти назначения согласуются с рядом дополнительных наблюдений, таких как роль Polδ в созревании отстающих цепей [25] — [27], важно предоставить дополнительные доказательства, чтобы подкрепить эти назначения, а также установить, если они эволюционно сохранены.

Синтез отстающих цепей с помощью Polδ

Чтобы исследовать роль Schizo. pombe Polδ во время репликации ДНК мы создали штаммы, которые реплицируются с использованием мутантного белка Polδ L591M. Мы показали, что Polδ L591M обладает высокой мутагенностью и индуцирует различные типы мутаций у Schizo. pombe . Нитьевая зависимость в переходных мутациях позволила нам сделать вывод, что основная роль Polδ заключается во время синтеза отстающей цепи (Рисунок 2 и Таблица 2). Однако мутационная предвзятость, наблюдаемая у этого мутанта, более слабая, чем можно было бы предсказать из исследований in vivo и in vitro эквивалентных S.cerevisiae мутант. Поскольку для этого исследования мы использовали клетки, способные к исправлению несоответствия (двойной мутант оказался летальным), наблюдаемые здесь спектры мутаций отражают неправильные пары, которые не удалось обнаружить и исправить. Это может повлиять на наши интерпретации. Например, бактериальный белок MutS имеет различное сродство к разным ошибкам спаривания, причем G: T является одним из лучших субстратов [28], [29]. Таким образом, специфичность репарации ошибочного спаривания могла частично маскировать смещение неправильного включения, вызванное Polδ L591M.Также возможно, что на спектры мутаций повлияло спонтанное повреждение оснований, которое приводит к несовпадениям, которые ускользают от исправления несовпадений. Эти предостережения означают, что, хотя наши результаты согласуются с функцией Polδ как полимеразы отстающей цепи, мы не можем исключить возможность того, что Polδ частично участвует в синтезе ведущей цепи или что Polε (или, действительно, другие полимеразы) могут частично воспроизводить отстающую цепь [ 10], [30].

В дополнение к точечным мутациям, которые ожидались от in vitro, исследований S.cerevisiae и человеческие полимеразы, мы также наблюдали значительно усиленное образование делеций и дупликаций в клетках polδ -L591M (Таблица 1). Все делеции и дупликации произошли в повторяющихся последовательностях ДНК. В большинстве дупликаций участвовало <100 оснований (таблица S1), что напоминает спектры мутаций для мутантов S. cerevisiae rad27 . Jin et al. показали, что скорость дупликации увеличивается за счет мутаций в домене экзонуклеазы Polδ [25] и S.cerevisiae polδ -L612M клеткам для жизнеспособности необходим функциональный Rad27 [31]. Эти исследования согласуются с нашими наблюдениями и подтверждают предположение, что Polδ непосредственно участвует в синтезе отстающих цепей у Schizo. pombe .

Размер наблюдаемых делеций был относительно большим, чем размер дупликаций. Более половины делеций были потерей> 100 п.н. последовательности. Cai et al. наблюдали, что дефицитная по экзонуклеазе ДНК-полимераза II E. coli генерирует аналогичные делеции, фланкированные последовательностями прямых повторов [32].Они предложили модель, в которой несоответствие, вызванное мутаторной полимеразой во время репликации первого прямого повтора, способствует перемещению праймера на второй прямой повтор. Кроме того, мы наблюдали низкую частоту инверсий, фланкируемых инвертированными повторяющимися последовательностями, и большинство этих инверсий были связаны с делецией, дупликацией и / или преобразованием гена. Эти события можно объяснить переключением шаблона. Взятые вместе, эти наблюдения предполагают, что несоответствие, образованное во время репликации ДНК, может вызывать различные виды перестройки генома.Интересно, что хромосомные аномалии, такие как разрывы хроматид, существенно повышены в клетках мышей Pold1 ^{+ / L604G} и Pold1 ^{+ / L604K} [33].

Синтез ведущих цепей, Polε

Чтобы исследовать роль Polε во время нормальной репликации ДНК, мы использовали наблюдение, что S. cerevisiae Polε M644G увеличивает включение rNMP [15], [34]. Мы впервые продемонстрировали, что Schizo. pombe polε-M630F клетки включают rNMP в ДНК с большей частотой, чем polε ⁺ клеток (фиг. 5A).Это свойство мутантной полимеразы позволило определить цепь, которая копируется мутантным Polε. Включение rNMP в ведущую цепь было поразительно выше в polε-M630F мутантных клетках по сравнению с polε ⁺ клетками (фиг. 5B и фиг. S1). Этот результат убедительно свидетельствует о том, что Polε синтезирует ведущую цепь. С другой стороны, мы не наблюдали существенной разницы во включении rNMP в отстающую цепь. Это указывает на то, что Polε играет, самое большее, ограниченную роль в синтезе отстающей цепи.

Schizo. Клетки pombe , содержащие polε-M630G , оказались нежизнеспособными, тогда как соответствующая мутация не вызывает летальности у S. cerevisiae . Интересно, что N-концевой каталитический домен Polε может быть полностью удален у обоих дрожжей [35], [36], в то время как каталитически мертвый Polε, который сохраняет полноразмерный белок, не является возможным. Наш анализ частоты мутаций клеток, экспрессирующих Polε-M630G на фоне polε ⁺ (рисунок S1), предполагает, что неактивность polε-M630G обусловлена тем, что соответствующий белок каталитически мертв, а не потому, что он увеличивает бремя мутаций сверх то, что является устойчивым.

Включение и восстановление rNMPs в ДНК

Помимо подтверждения роли Polε в репликации ведущей цепи, результаты на фиг. 5 распространяются на Schizo. pombe — два важных вывода, сделанных на основе более ранних исследований с использованием S. cerevisiae , а именно, что большое количество рНТФ может быть включено в формирующуюся ведущую цепь во время репликации, не оказывая сильного влияния на рост (рис. 4А), и рНМП, которые стабильно включаются в цепь . Шизо.pombe с помощью эукариотической репликазы эффективно репарации РНКазы h3-зависимым образом. В S. cerevisiae нерепарированные rNMPs в ДНК способствуют образованию коротких делеций между короткими, тандемно повторяющимися последовательностями ДНК по механизму, на который не влияет статус репарации ошибочного спаривания [34], и запускается зависимым от топоизомеразы 1 расщеплением rNMP [37]. ]. Многие делеции происходят способом, который зависит от ориентации репортерного гена по отношению к ближайшей точке начала репликации [15], указывая на то, что они являются результатом rNMPs, включенных в формирующуюся ведущую цепь с помощью Polε.Характеристики Schizo. Описанные здесь штаммы pombe polε-M630F дают возможность определить, сохраняются ли эти последствия у делящихся дрожжей, а также проверить, влияет ли на переключение типа спаривания, которое зависит от rNMPs в ДНК [38], повышенное включение rNMP репликазами и / или по статусу РНКазы h3 или топоизомеразы.

Репликация ДНК в

Schizo. помбе

В этом исследовании мы изучили роль Polδ и Polε во время нормальной репликации ДНК у Schizo.pombe двумя разными способами. Первым методом был генетический анализ асимметрии спектров мутаций в мутантных клетках polδ . Вторым был физический анализ включения rNMP с использованием мутантных клеток polε . Комбинация этих анализов показывает, что геномная ДНК реплицируется в Schizo. pombe аналогично тому, как это было предложено для S. cerevisiae . Потому что Schizo. pombe и S. cerevisiae сильно различаются с точки зрения эволюции [39], [40], наши результаты подтверждают интерпретацию того, что репликация у всех эукариот подчиняется сходным правилам.Мы также добавляем физический анализ к предыдущим генетическим данным, увеличивая вероятность того, что интерпретация генетики действительно верна. В основном мы исследовали репликацию ДНК в геномном локусе ura4 , поскольку инициация репликации в этом локусе, как известно, очень эффективна (рис. 1B). Однако аналогичный результат был получен для второго независимого локуса с использованием физического метода определения активности Polε (рисунок S1). Таким образом, разумно предположить, что репликация ДНК происходит одинаковым образом по всему геному.Однако остается возможность, что клетки используют эти две полимеразы по-разному в некоторых конкретных ситуациях или в некоторых конкретных локусах.

Материалы и методы

Schizo. pombe Штаммы, среды и методы

Schizo. pombe выращивали в среде дрожжевого экстракта (YE). Были использованы стандартные генетические и молекулярные процедуры, как описано ранее [41]. Для исследования роста клеток на планшетах серийные разведения клеток наносили на чашки с YEA (агар YE) и инкубировали при 30 ° C.

Создание мутантных штаммов ДНК-полимеразы

Гены cdc6 ⁺ и cdc20 ⁺ были амплифицированы с помощью ПЦР и клонированы в pUC19. cdc6-L591F и cdc20-M630F мутантные гены были сконструированы с помощью ПЦР-опосредованного сайт-направленного мутагенеза и секвенированы, чтобы гарантировать, что введена только желаемая мутация. В Schizo были введены гены как дикого типа, так и мутантные. pombe в их нативных локусах путем рекомбинации-опосредованного обмена кассет (RMCE) [17].

Определение скорости спонтанной мутации

Частота спонтанных мутаций определялась флуктуационным анализом, как описано ранее [42]. Вкратце, 11 независимых одиночных колоний суспендировали в 5 мл среды YEP (YE + полипептон) и выращивали до насыщения при 30 ° C. Клетки разводили соответствующим образом и высевали на YEA или YEA, содержащие 0,1% 5-фтороротовую кислоту (5-FOA). Колонии подсчитывали после 4 дней инкубации при 30 ° C. Скорости мутаций рассчитывались методом медианы [43].Геномную ДНК из одной устойчивой к 5-FOA колонии выделяли, и конструкцию ura5-ura4 амплифицировали с помощью ПЦР для секвенирования.

Двухмерный гель-анализ

Направленный двухмерный гель-анализ выполняли, как описано ранее [22], с изменениями. Геномную ДНК экстрагировали и расщепляли Hind III и Blp I, как описано в [44]. После электрофореза в первом измерении ДНК расщепляли Spe I в срезе геля и подвергали электрофорезу во втором измерении.Промежуточные продукты репликации выявляли с помощью саузерн-блоттинга.

Обнаружение чувствительных к щелочам участков в геномной ДНК

Геномная ДНК была извлечена из экспоненциально растущих клеток и очищена с помощью Qiagen genomic-tip 100 / G. 5 мкг непереваренной или расщепленной ДНК Eco RI инкубировали в 0,3 М NaOH при 55 ° C в течение 2 часов и подвергали электрофорезу в 1% щелочном агарозном геле [15]. Гели нейтрализовали и окрашивали бромидом этидия с последующим саузерн-блоттингом.

Саузерн-блоттинг

Саузерн-блоттинг проводили согласно [45].Представляющие интерес фрагменты ДНК амплифицировали с помощью ПЦР из Schizo. pombe и использовали в качестве матриц для получения меченых зондов. Радиоактивные нуклеотиды включали в ДНК с использованием гранул для маркировки ДНК Ready-To-Go (GE Healthcare) или специфичных для цепи праймеров и TaKaRa Ex Taq (TAKARA BIO).

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Эктопическая экспрессия мутантов полимеразы-эпсилон. А. Схема локусов, в которых polε ⁺ или мутантные версии экспрессируются с промотора cdc20 (Polε) после интеграции ниже ura4 ⁺.B. Частоты мутаций указанных штаммов с или без исправления рассогласования. C. 1. Уровни белка Polε дикого типа, меченного GFP, экспрессируемого из локуса cdc20 . 2–4, уровни белка polε ⁺, меченного GFP, и указаны мутанты, экспрессирующиеся в эктопическом локусе на фоне Polε ⁺.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.s001

(TIF)

Рисунок S2.

Смещение цепи

для включения rNMP в локусе ade6 .A. Схема локусов по обе стороны от ars3045 (Heicheinger et al, 2006. EMBO J. 25, 5171–5179), показывающая положения сайтов Bam h2, а также расположение и специфичность цепи используемых зондов. C. Чувствительность к щелочам каждой нити, либо слева от ars3035 / 3036 (датчики E и F), либо справа (датчики G и H). Штаммы были либо polε ⁺ (+), либо pol ε -M630F (-) с или без сопутствующей делеции rnh301 , как указано.Зонд E и G гибридизуются с верхней цепью, зонды F и H гибридизуются с нижней цепью.

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.s002

(TIF)

Таблица S2.

Отсутствие значительного смещения цепи мутаций, наблюдаемых для штамма polε-M630F на фоне прямого и обратного ura4 ⁺: ura5 ⁺ . * Ожидаемые ошибки при синтезе транскрибируемой цепи. ** ожидаемые числа основаны на анализе Polε M644F in vitro от Pursell ZF et al. [7].

https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1002407.s004

(DOC)

Благодарности

Мы благодарим Джессику Уильямс и Кен’Ичи Мизуно за полезные комментарии к рукописи.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AMC TAK IM. Проведены эксперименты: И.М. Проанализированы данные: AMC TAK IM. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: IM. Написал бумагу: IM AMC TAK.

Ссылки

1.Гарг П., Бургерс П.М. (2005) ДНК-полимеразы, которые размножают вилку репликации эукариотической ДНК. Crit Rev Biochem Mol Biol 40: 115–128.
2. Джонсон А., О’Доннелл М. (2005) Репликазы клеточной ДНК: компоненты и динамика на вилке репликации. Анну Рев Биохим 74: 283–315.
3. Кункель Т.А. (2009) Развивающиеся взгляды на (не) верность репликации ДНК. Колд-Спринг-Харб Symp Quant Biol 74: 91–101.
4. Кункель Т.А., Бебенек К. (2000) Надежность репликации ДНК.Анну Рев Биохим 69: 497–529.
5. Ник МакЭлхинни С.А., Горденин Д.А., Стит К.М., Бюргерс П.М., Кункель Т.А. (2008) Разделение труда на вилке репликации эукариот. Mol Cell 30: 137–144.
6. Ник МакЭлхинни С.А., Стит С.М., Бюргерс П.М., Кункель Т.А. (2007) Неэффективная корректура и предвзятые показатели ошибок во время неточного синтеза ДНК мутантным производным дельта ДНК-полимеразы Saccharomyces cerevisiae. J Biol Chem 282: 2324–2332.
7. Pursell ZF, Isoz I, Lundstrom EB, Johansson E, Kunkel TA (2007) Регулирование верности ДНК-полимеразы семейства B с помощью консервативного остатка активного сайта: характеристика мутантов M644W, M644L и M644F дрожжевой ДНК-полимеразы эпсилон.Nucleic Acids Res 35: 3076-3086.
8. Pursell ZF, Isoz I, Lundstrom EB, Johansson E, Kunkel TA (2007) Дрожжевая ДНК-полимераза эпсилон участвует в репликации ведущей цепи ДНК. Наука 317: 127–130.
9. Burgers PM (2009) Динамика полимеразы на вилке репликации эукариотической ДНК. J Biol Chem 284: 4041-4045.
10. Kunkel TA, Burgers PM (2008) Разделение рабочей нагрузки на вилке репликации эукариот. Тенденции Cell Biol 18: 521–527.
11. Schmitt MW, Venkatesan RN, Pillaire MJ, Hoffmann JS, Sidorova JM, et al. (2010) Мутации активного сайта в дельте ДНК-полимеразы млекопитающих изменяют точность и прогрессию репликационной вилки. J Biol Chem 285: 32264–32272.
12. Schmitt MW, Matsumoto Y, Loeb LA (2009) Высокая точность и способность обхода повреждений человеческой ДНК-полимеразы дельта. Biochimie 91: 1163–1172.
13. Ниими А., Лимсиричайкул С., Йошида С., Иваи С., Масутани С. и др.(2004) Пальмовые мутанты в ДНК-полимеразах альфа и эта изменяют точность репликации ДНК и активность трансформации. Mol Cell Biol 24: 2734–2746.
14. Сакамото А.Н., Стоун Д.Е., Кисслинг Г.Е., МакКаллох С.Д., Павлов Ю.И. и др. (2007) Мутаторные аллели дрожжевой ДНК-полимеразы zeta. Ремонт ДНК (Amst) 6: 1829–1838.
15. Ник Макэлхинни С.А., Кумар Д., Кларк А.Б., Ватт Д.Л., Уоттс Б.Э. и др. (2010) Нестабильность генома из-за включения рибонуклеотидов в ДНК. Nat Chem Biol 6: 774–781.
16. Nick McElhinny SA, Watts BE, Kumar D, Watt DL, Lundstrom EB, et al. (2010) Обильное включение рибонуклеотидов в ДНК репликативными полимеразами дрожжей. Proc Natl Acad Sci U S A 107: 4949–4954.
17. Watson AT, Garcia V, Bone N, Carr AM, Armstrong J (2008) Мечение генов и замена генов с использованием рекомбиназо-опосредованного обмена кассет в Schizosaccharomyces pombe. Gene 407: 63–74.
18. Fraser JL, Neill E, Davey S (2003) Делящиеся дрожжи Uve1 и Apn2 действуют в различных путях восстановления окислительных повреждений in vivo.Ремонт ДНК (Amst) 2: 1253–1267.
19. Dubey DD, Zhu J, Carlson DL, Sharma K, Huberman JA (1994) Три элемента ARS вносят вклад в область происхождения репликации ura4 в делящихся дрожжах, Schizosaccharomyces pombe. EMBO J 13: 3638–3647.
20. Patel PK, Arcangioli B, Baker SP, Bensimon A, Rhind N (2006) Источники репликации ДНК срабатывают в делящихся дрожжах стохастически. Mol Biol Cell 17: 308–316.
21. Dai J, Chuang RY, Kelly TJ (2005) Истоки репликации ДНК в геноме Schizosaccharomyces pombe.Proc Natl Acad Sci U S A 102: 337–342.
22. Фридман К.Л., Брюер Б.Дж. (1995) Анализ промежуточных продуктов репликации с помощью двумерного электрофореза в агарозном геле. Методы Enzymol 262: 613–627.
23. Venkatesan RN, Hsu JJ, Lawrence NA, Preston BD, Loeb LA (2006) Мутаторные фенотипы, вызванные заменой в консервативном остатке мотива A в дельте эукариотической ДНК-полимеразы. J Biol Chem 281: 4486–4494.
24. Stone JE, Kissling GE, Lujan SA, Rogozin IB, Stith CM, et al.(2009) Синтез ДНК низкой точности производным мутатора L979F ДНК-полимеразы Saccharomyces cerevisiae zeta. Nucleic Acids Res 37: 3774–3787.
25. Джин Ю.Х., Оберт Р., Бургерс П.М., Кункель Т.А., Резник М.А. и др. (2001) 3 ‘→ 5’ экзонуклеаза ДНК-полимеразы дельта может заменять 5 ‘эндонуклеазу лоскута Rad27 / Fen1 при обработке фрагментов Окадзаки и предотвращении нестабильности генома. Proc Natl Acad Sci U S A 98: 5122–5127.
26. Garg P, Stith CM, Sabouri N, Johansson E, Burgers PM (2004) Холостой ход ДНК-полимеразой дельта поддерживает лигируемый разрыв во время репликации ДНК с отстающей цепью.Genes Dev 18: 2764–2773.
27. Павлов Ю.И., Фрам С., Ник МакЭлхинни С.А., Ниими А., Сузуки М. и др. (2006) Доказательства того, что ошибки, сделанные ДНК-полимеразой альфа, исправляются ДНК-полимеразой дельта. Curr Biol 16: 202–207.
28. Brown J, Brown T, Fox KR (2001) Сродство связывающего несовпадение белка MutS с гетеродуплексами, содержащими разные несовпадения. Biochem J 354: 627–633.
29. Su SS, Lahue RS, Au KG, Modrich P (1988) Специфичность неправильного спаривания метил-направленной коррекции несоответствия ДНК in vitro.J Biol Chem 263: 6829–6835.
30. Павлов Ю.И., Щербакова П.В. (2010) ДНК-полимеразы на эукариотической вилке — 20 лет спустя. Mutat Res 685: 45–53.
31. Ли Л., Мерфи К.М., Каневец Ю., Реха-Кранц Л.Дж. (2005) Чувствительность к фосфоноуксусной кислоте: новый фенотип для исследования дельта ДНК-полимеразы в Saccharomyces cerevisiae. Генетика 170: 569–580.
32. Cai H, Yu H, McEntee K, Kunkel TA, Goodman MF (1995) Очистка и свойства ДНК-полимеразы II дикого типа и с дефицитом экзонуклеазы из Escherichia coli.J Biol Chem 270: 15327–15335.
33. Венкатесан Р.Н., Тройтинг П.М., Фуллер Э.Д., Голдсби Р.Э., Норвуд Т.Х. и др. (2007) Мутация в активном центре полимеразы дельта ДНК-полимеразы мыши увеличивает геномную нестабильность и ускоряет онкогенез. Mol Cell Biol 27: 7669–7682.
34. Clark AB, Lujan SA, Kissling GE, Kunkel TA (2011) Нестабильность последовательности тандемных повторов, не зависящая от репарации несоответствий, возникающая в результате включения рибонуклеотидов ДНК-полимеразой варепсилон.Ремонт ДНК (Amst) 10: 476–482.
35. Kesti T, Flick K, Keranen S, Syvaoja JE, Wittenberg C (1999) Каталитические эпсилон-домены ДНК-полимеразы незаменимы для репликации ДНК, репарации ДНК и жизнеспособности клеток. Mol Cell 3: 679–685.
36. Feng W, D’Urso G (2001) Клетки Schizosaccharomyces pombe, лишенные аминоконцевых каталитических доменов ДНК-полимеразы эпсилон, жизнеспособны, но требуют контроля контрольной точки повреждения ДНК. Mol Cell Biol 21: 4495–4504.
37. Ким Н., Хуанг С. Н., Уильямс Дж. С., Ли Ю. К., Кларк А. Б. и др. (2011) Мутагенный процессинг рибонуклеотидов в ДНК дрожжевой топоизомеразой I. Science 332: 1561–1564.
38. Vengrova S, Dalgaard JZ (2004) РНКаза-чувствительная модификация ДНК инициирует Schizo. переключение типа «помба». Genes Dev 18: 794–804.
39. Kuramae EE, Robert V, Snel B, Boekhout T (2006) Конфликтное филогенетическое положение Schizosaccharomyces pombe.Геномика 88: 387–393.
40. Sipiczki M (2000) Где на дереве жизни сидят делящиеся дрожжи? Genome Biol 1: ОБЗОРЫ 1011–1011.1014.
41. Морено С., Клар А., Медсестра П. (1991) Молекулярно-генетический анализ делящихся дрожжей Schizosaccharomyces pombe. Методы Enzymol 194: 795–823.
42. Фостер П.Л. (2006) Методы определения частоты спонтанных мутаций. Методы Enzymol 409: 195–213.
43. Lea DaC CA (1949) Распределение числа мутантов в бактериальных популяциях.Дж. Генетика 49: 264–285.
44. Arcangioli B (1998) Разрыв ДНК, специфичный для сайта и цепи, обеспечивает асимметричный переключающий потенциал у делящихся дрожжей. EMBO J 17: 4503–4510.
45. Lambert S, Watson A, Sheedy DM, Martin B, Carr AM (2005) Крупные хромосомные перестройки и повышенная рекомбинация на индуцибельном сайт-специфическом барьере вилки репликации. Cell 121: 689–702.

Климат | Бесплатный полнотекстовый | 133-летний отчет об изменении и изменчивости климата из Шеффилда, Англия,

3.1. Среднее значение

На рис. 1 показано расположение WP и показано, что с точки зрения годовой климатологии WP находится на границе между более теплым, сухим, юго-восточным и более холодным, влажным, северо-западом Англии. На рисунке 2 показан годовой цикл от WP для TX, TN и осадков. Среднемесячные данные и климатические записи приведены в Таблице 2, Таблице 3 и Таблице 4, временные ряды для средней температуры и количества осадков показаны на Рисунке 3, а скорости трендов для различных периодов для средней температуры, TX, TN и осадков приведены в Таблице 5. .Январь — самый холодный месяц, а июль — самый теплый месяц (Рисунок 2; Таблица 3), но восемь из десяти экстремально жарких рекордов были обнаружены в августе или сентябре, а не в июле (Таблица 2). Наибольшее количество осадков выпадает в декабре (ежемесячно) и зимой (сезонно). Отличительной особенностью рисунка 2c является влияние отдельных крупных летних осадков на среднесуточное стандартное отклонение и максимальное суточное количество осадков (рисунок 2; таблица 2). Среднее значение суточного максимального количества осадков за девять нелетних месяцев составляет 26.8 мм, тогда как за три летних месяца — 35,1 мм. Вероятность выпадения осадков (т.е. день с> = 0,1 мм) в данный календарный день составляет в среднем 52,5% по всей записи; существует сезонный цикл с более высокой вероятностью выпадения осадков осенью и зимой, а самые низкие и самые высокие дневные значения колеблются от 35,6% (29 мая) до 73,5% (3 ноября). С начала XXI века были установлены четыре из десяти рекордов суточных осадков, но был установлен только один рекорд экстремально высоких или низких температур: 1 июля 2015 года — шестой самый теплый день за всю историю наблюдений (таблица 2).2011 год является самым теплым годом в записи WP (Таблица 4), и во временных рядах среднегодовой температуры очевидна четкая обобщенная тенденция к потеплению (Рисунок 3). Анализ тенденций (таблица 5) показывает, что для долгосрочной записи 1883–2015 годов все годовые и сезонные тренды средней температуры, TX и TN являются статистически значимыми, в диапазоне от 0,47 до 1,35 ° C · век ⁻¹. Весна — это сезон с самым сильным средним сигналом потепления (1,28 ° C · век ^-1), а годовые, летние и осенние показатели близки к 1 ° C · век ^-1, но в зимний период наблюдается потепление. оцените только половину, чем другие сезоны, на 0.58 ° C · век ⁻¹. Для других периодов направление и значение тренда не столь распространены. Примеры включают зиму 1901–2000 гг., Когда направление тренда отрицательное, но лишь очень незначительно и незначительно, а также в течение периода 1941–1970 гг. Во все сезоны. Для периодов ближе к концу записи (1961–1990, 1971–2000, 1981–2010 и 1991–2014) все сезонные и среднегодовые тренды температуры, TX и TN положительны, но значимость тренда не является широко распространенной.Годовое количество осадков на протяжении всей записи значительно увеличивается со скоростью 68,6 мм · век ⁻¹ (Таблица 5; Рисунок 3), что, за исключением осенних осадков в период 1941–1970 годов, является единственным значительным увеличением количества осадков в ЗП. Из пяти самых сухих / самых влажных и самых холодных / самых теплых месяцев, сезонов и лет (Таблица 4) декабрь 2010 и март 2013 — единственные месяцы с начала 21-го века, которые демонстрируют рекордные холода. Рекордные теплые месяцы / сезоны / годы с начала 21 века кажутся более распространенными, хотя февраль, май и август не были рекордными теплыми месяцами после 2001 года, но все остальные месяцы и сезоны имеют по крайней мере один из пяти рекордных месяцев. /сезоны.Только четыре месяца (январь 2006 г., март 2011 г., апрель 2007 г. и декабрь 2010 г.) и один сезон (весна 2011 г.) были рекордно засушливыми, однако 2003 и 2011 гг. Стали пятым и третьим наиболее засушливыми годами за всю историю наблюдений, соответственно. И наоборот, 2012 и 2002 годы являются первым и третьим самыми влажными годами за всю историю наблюдений, соответственно, а в июне (лето) было три из пяти (два из пяти) рекордно влажных месяцев (сезонов) с начала века.

3.2. Крайние значения

Таблица 6 и рисунок 4 показывают результаты применения анализа ETCCDI к данным WP.Как и в случае анализа «базовых» данных (т. Е. Средней температуры и осадков, TX и TN) столетние тенденции на протяжении всего периода и 20-го века значительны по многим индексам, включая положительные тенденции к более теплым или более влажным условиям в « абсолютные »индексы температуры и осадков (TXx, TXn, TNn, TNx, RX1Day, RX5Day и R10mm). Значительное долгосрочное увеличение TX90p и TN90p и уменьшение TX10p и TN10p также указывает на условия потепления, а положительные тенденции в SDII (значительный) и R95p указывают на увеличение количества интенсивных / более сильных осадков (но не обязательно частоты).Тенденции R95p, R99p и R20mm положительны и значимы для 20-го века, но не являются долгосрочным рекордом (1883–2015). В то время как долгосрочное увеличение во всех трех из этих рядов можно визуально вывести (рис. 4), долгосрочные тренды R99p и R20mm приведены как ноль с помощью метода Тейла-Сена. При использовании этого метода, если более половины точек данных в серии имеют значение, которое совпадает с предыдущим / последующим значением, то результирующая линия тренда будет равна нулю (поскольку метод Тейла-Сена является медианным значением всех возможных ранжированные склоны).Пороговые значения для 95-го и 99-го процентилей суточных осадков составляют 18,2 и 31 мм · сутки ^-1, соответственно. Это представляет несколько любопытное различие между долгосрочным трендом R20 мм и трендом R95p (29 мм · век ^-1, Таблица 6), которое в основном связано с разными единицами измерения — R20 мм требует увеличения частоты «очень тяжелых» ”Дней с осадками, тогда как R95p — нет (только количество осадков) — но мы также находим нетривиальное количество дней (183), когда осадки были между 18.2 и 20 мм (относительно 635 R20 мм дней), подчеркивая, насколько тщательный выбор должен быть сделан при определении пороговых значений для анализа «умеренных» экстремальных явлений (т.е. период повторяемости ~ один год), чтобы устранить любую двусмысленность в отношении Для тенденции к экстремальным осадкам мы дополняем анализ индексов ETCCDI тенденциями в квантилях осадков с помощью квантильной регрессии [19], которая показывает четкое разделение между отрицательными тенденциями в 80-м процентилях (Рисунок S1).Долговременных изменений CWD нет, а небольшое, но незначительное снижение CDD. Для значительного изменения этих индексов потребуется очень сильный сигнал, учитывая, что среднегодовая вероятность выпадения осадков за день составляет 52,5%. При отсутствии значительного изменения частоты выпадения осадков и явном указании на увеличение количества экстремальных осадков (Рисунок 4, Рисунок S1), большая часть увеличения годового количества осадков (Таблица 5, Рисунок 3), следовательно, должна происходить из-за выпадения экстремальных осадков, которые в течение последних ~ 35 лет, по-видимому, преобладают экстремальные летние осадки (Таблица 2, Таблица 5).Долгосрочные тенденции экстремальных индексов подтверждают выводы, полученные на основе среднегодовых данных об общем потеплении и увеличении количества осадков. Как и в случае данных о сезонных и годовых температурах, значимость тренда для более коротких периодов и скорости для периодов в конце записи (1961–1990, 1971–2000, 1981–2010 и 1991–2014) редко бывают повсеместно значимыми, но в целом согласны направление. Тенденции для SU25 и TR15 показывают долгосрочное увеличение (таблица 6), при этом 1974 и 1972 годы, соответственно, были последними годами, когда был зарегистрирован нулевой счет для обоих этих индексов (Рисунок 4).Увеличение (уменьшение) количества дней в WSDI (CSDI) возможно визуально (рисунок 4), но, как упоминалось ранее, тренд Тейла-Сена дает нулевое значение с множеством последовательно равных значений. Типичная погодная картина, связанная с экстремально высокими и низкими температурами и осадками (с использованием дат из Таблицы 2), показана на графике составной аномалии на Рисунке 5. Рекордно жаркие дни в WP связаны с летними условиями антициклона, сосредоточенными над южной Скандинавией, что позволяет адвекция теплого континентального воздуха в сторону Великобритании.Рекордно холодные дни случаются при крупномасштабном изменении зимних градиентов климатологического давления, вызывающем аномальный восточный струйный поток, несущий холодный арктический воздух через большую часть северной Европы. Рекордные дни с осадками, которые происходят в летние месяцы (таблица 2), обусловлены циклоническими условиями, сосредоточенными над / вокруг юго-запада Великобритании. Положительные аномалии доступной конвективной потенциальной энергии подразумевают вклад в интенсивность осадков за счет усиления конвекции (то есть, почему все рекордные значения осадков выпадают летом, а не в другие сезоны), но, к сожалению, данные о субсуточных осадках не были доступны для анализа, который мог бы иметь предоставил дальнейшее понимание.Некоторые записи о горячих и холодных экстремальных явлениях были частью одного и того же метеорологического «события», т. Е. Последовательных дней (таблица 2), поэтому мы воспроизвели составной анализ, используя последовательно ранжированные рекордные дни, которые были от уникальных событий (не последовательных дней), чтобы убрать весовые коэффициенты. в составном графике от двух / трех конкретных событий, но это не сильно изменило состав графиков (не показаны). Хотя четыре из десяти суточных рекордов осадков были установлены с начала 21 века (Таблица 2) рекордное событие 15 июля 1973 г. более чем на 30 мм превышает любое другое дневное значение.Рекордные значения теплого (3 августа 1990 г.) и холодного (8 февраля 1895 г.) рекордов также превосходят второй самый теплый (самый холодный) день на 0,8 ° C (1,3 ° C). Поскольку эти события представляют собой статистику экстремумов записи WP, каждое на некотором расстоянии, они отмечают абсолютный диапазон экстремумов, возможных в историческом климате WP. Это вызывает два вопроса. Во-первых, какова / была вероятность этих экстремальных климатических явлений, происходящих в то время и в настоящее время (2015 г.), и есть ли обнаруживаемый антропогенный компонент? Во-вторых, какова их эволюция в будущем при потеплении климата.Были ли эти события исключительными и маловероятными, или будущее потепление климата превратит эти записи в «нормальные» условия? Чтобы ответить на этот вопрос, мы используем два подхода. В разделе 3.4 мы анализируем потенциальную будущую эволюцию двух экстремальных индексов, TXx и RX1day, из глобальных климатических моделей. Здесь мы анализируем три записи климата WP, обсужденные выше, путем подгонки временных рядов TNn, TXx и RX1day к распределению обобщенных экстремальных значений (подробности приведены в Приложении A) со сглаженными глобальными средними температурами в качестве ковариаты [21,22,23, 24].В таблице 7 представлены результаты этого анализа для периодов повторяемости, рассчитанных для климата во время записи и снова в 2015 году, а также соответствующее соотношение между ними для статистики записи WP и определенными апостериори «умеренными» экстремальными значениями (порог 75 мм). , 32 ° C и –8 ° C для осадков, TXx и TNn, соответственно), которые имеют приблизительный период повторяемости в десятилетие. Рассматривая сначала «умеренные» экстремальные значения, для TXx 32 ° C будет период повторяемости 11 лет (диапазон этих оценок приведен в Таблице 7) в то время, когда фактический рекорд TXx был установлен в 1990 году, и эквивалентный период повторяемости семь лет в 2015 году.Событие TNn с температурой −8 ° C можно было ожидать один раз в пять лет в 1895 году, но теперь только один раз в 11 лет в 2015 году. Выпадение осадков 75 мм в 1973 году имело бы 53-летний период повторяемости, но, опять же, теперь возможно. следует ожидать один раз каждые 11 лет в климате 2015 года. Влияние глобального потепления изменило соотношение между временами возврата (уменьшенное для TNn) этих рекордов в 1,6 раза для TXx, в 2,2 раза для TNn и в 4,7 раза для осадков по сравнению с год, когда были установлены фактические рекорды.Что касается фактических рекордных значений WP, возврат TXx составил 82 года, TNn 192, а количество осадков 2508. Возвращаемые значения TXx и осадков под влиянием потепления снизились до 38 (TXx) и 252 года. (осадки) лет и увеличились до 529 лет для TNn, которые представляют собой отношения в периоды повторяемости 2,2 (TXx), 2,8 (TNn) и 10 (осадки). Мы хотим пояснить, что существуют большие неопределенности, связанные с анализом экстремальных значений, и результаты, представленные для значений записи WP, должны интерпретироваться с осторожностью.Есть большие интервалы вокруг периодов повторяемости осадков, которые, как правило, не следует оценивать для периодов, превышающих длину временного ряда более чем в четыре раза [25]. Однако значения, приведенные в Таблице 7, отражают тот факт, что запись об осадках 1973 г. действительно была исключительной в записи WP, и любое соответствие экстремального значения будет затруднять точное ограничение этого (когда один большой выброс находится так далеко от центра распределения) . Чтобы ответить на наш первоначальный вопрос (относительно вероятности возникновения события и влияния глобального потепления), независимо от того, насколько верят точной количественной оценке времени возврата записей WP, наблюдаемая закономерность заключается в том, что влияние глобального потепления ( как ковариата при определении местоположения и / или параметра масштаба распределения экстремальных значений) служит для уменьшения (увеличения) периода повторяемости, связанного с экстремально теплыми (экстремально холодными) температурами и осадками.

3.3. Анализ климатической модели

Два экстремальных индекса, TXx и RX1Day, были выбраны для анализа вместе со средним TX и осадками из выходных данных Фазы 5 взаимного сравнения связанных моделей (CMIP5). Эти два социально значимых индекса были выбраны как наилучшие отражающие явления высокой ударной температуры и осадков. Мы получили среднемесячные данные о TX и осадках из ансамбля CORDEX [26], размещенного на веб-сайте Climate Explorer (https://climexp.knmi.nl/start.cgi) для 41 региональной климатической модели европейского домена, работающей при 0.Разрешение 5 ° (принудительное исполнение модели CMIP5). Кроме того, мы получили ежедневные данные по TX и осадкам из набора статистически уменьшенных данных с разрешением 0,25 ° из NASA Earth Exchange (NEX, [27]). Из этих двух архивов (Дополнительный B) мы извлекаем блок сетки, ближайший к WP из каждой модели, и используем его для оценки будущих изменений климата в средней годовой (CORDEX и NEX) и экстремальной (NEX) температуре и осадках. Мы сравниваем исторический базовый период 1951–2005 гг. С тремя будущими периодами; а 1.На 5 ° C и 2 ° C выше доиндустриального мира и в условиях конца 21 века в 2080–2099 годах. Наш выбор этих периодов основан на Парижском соглашении 2015 года об ограничении глобального потепления на 2 ° C выше доиндустриальных температур и попытке ограничить потепление до 1,5 ° C [28]. Мы определяем миры с 1,5 и 2 градусами как годы из будущих климатических прогнозов, где 15-летняя средняя глобальная температура приповерхностного воздуха находится в диапазоне от 1,4–1,6 ° C (для мира 1,5 ° C) до 1,9–2,1 ° C (для На 2 ° C в мире) выше средней температуры за исторический период 1861–1890 годов для каждой модели.Согласно Репрезентативному Пути концентрации 8.5 (RCP8.5) — наиболее серьезному из четырех сценариев потепления, используемых в прогнозах CMIP5, и сценарию вынуждающих воздействий, используемому в результатах 21 модели NEX, которые мы анализируем, — мир 1,5 ° C с нашим определением может появиться уже как 2006 год (конец 2048 года) со средним годом 2024 года и 2 ° C в мире уже в 2021 году (конец 2061 года) со средним годом 2039 года. На рисунке 6 представлены гистограммы среднего значения за 1951–2005 годы для Уэстон-Парка и Модельные ансамбли CORDEX / NEX для: (а) среднего TX; (б) TXx; (c) означают осадки; и (d) RX1Day.Представлены гистограммы для миров 1,5 / 2 ° C, а также периода конца 21 века. Данные представлены в виде аномалий относительно периода 1951–2005 гг. (И в виде процентных аномалий для осадков), при этом цифра воспроизводится с использованием абсолютных значений в дополнительном материале (рисунки S2 и S3). Начиная со среднего TX (рисунок 6a), мы показываем, что диапазон значений в базовом периоде сопоставим между WP и ансамблями CORDEX / NEX, с усами (в 1,5 раза превышающими межквартильный диапазон) всех трех коробчатых диаграмм, все ~ ± 1.5 ° С. Более теплый мир на 1,5 / 2 ° C сдвигает распределение TX вверх на ~ 1 ° C, а NEX немного теплее, чем CORDEX в обоих случаях. T-тест между значениями 1,5 / 2 ° C определяет значительную разницу в средних значениях 0,3 / 0,4 ° C для CORDEX и NEX соответственно, то есть статистическую разницу между этими идеализированными мирами. Что касается среднего периода модели 1951–2005 гг., CORDEX TX нагревает 0,9 ± 0,1 ° C / 1,1 ± 0,1 ° C в мире 1,5 / 2 ° C, а NEX TX нагревает 1,0 ± 0,1 ° C / 1,4 ± 0,1 ° C в мире. 1,5 / 2 ° C мира соответственно.Однако диапазон распределений показывает, что миры 1,5 ° C и 2 ° C в целом сопоставимы, особенно по сравнению со сценарием воздействия RCP8.5 конца века, в котором среднее потепление TX вдвое больше, чем для обоих сценариев 1,5 / 2 ° C мир. Шаблон повторяется для TXx (рисунок 6b). Здесь мы видим, что исключительный рекорд TXx, установленный в 1990 году в записи WP, выглядит как очевидный выброс в исторический базовый период, а ансамбль NEX хорошо согласуется с распределением WP. Из 21 модели NEX 13/1155 лет (1951–2005) имеют стандартизованную аномалию TXx (мы используем эту метрику для учета различий в дисперсии между записью WP и отдельными сериями моделей), превышающую или равную стандартизованной аномалии TXx. аномалия записи WP 1990 г., которая дает приблизительный период повторяемости 89 лет, что сравнимо с 82-летним периодом повторяемости TXx для климата 1990 г. в данных наблюдений (Таблица 7).Для модельных лет в мире 1,5 / 2 ° C ранее маловероятный рекорд TXx становится достижимым в пределах диапазона модельного распределения, и такая аномалия (5,8 ° C) является почти медианным значением в модельные годы к концу век под RCP8.5. Модель среднего отклика TXx в мире 1,5 ° C (1,6 ± 0,3 ° C) статистически не отличается от такового для мира 2 ° C (1,9 ± 0,6 ° C), но период 2080–2099 гг. Значительно теплее (5,7 ± 0,3 ° C). ° С). Для среднего годового количества осадков (рис. 6c) значения WP отклоняются от среднего на ~ ± 30%, при этом модели достигают аналогичного диапазона, но с выбросами до ~ ± 50%.Существует небольшое увеличение (таблица 2), которое не превышается ни при каком сценарии, даже выбросами, что указывает на исключительный характер события 1973 года (или на недостаток модели в моделировании экстремальных осадков, который обсуждается в разделе 4.2). Сдвиги в среднем для каждого сценария здесь более выражены, чем для среднего количества осадков. Сдвиг в модельном среднем для RX1Day, связанный с миром 1,5 / 2 ° C, составляет 7,5% ± 3,5% / 10,2% ± 5,1% соответственно, с t-тестом, показывающим, что для миров 1,5 / 2 ° C нет статистически различных значений.Ожидаемое увеличение RX1Day к 2080–2099 гг. Составляет 18,5% ± 15,8%. Мы обсуждаем последствия и обоснованность этих прогнозов в Разделе 4.2. Чтобы поместить изменения в WP в более широкий контекст, мы усредняем все доступные мировые модельные годы 1,5 / 2 ° C и наносим ансамблевые различия на рис. 7. Структуры для среднего значения TX и осадки соответствуют ожидаемым моделям потепления климата — усиление Арктики, материки теплее, чем океаны, меньшее потепление в центральной части Северной Атлантики (Рисунок 7a) и усиление существующих моделей осадков / испарения (Рисунок 7e).Есть некоторые заметные контрасты между 2 ° C и 1,5 ° C в TXx (рис. 7c). В анализируемом здесь ансамбле разница между 1,5 / 2 ° C очень сильно проявляется в регионах морского льда Арктики и предполагает явный контраст между сушей и океаном в различиях TXx. Изменения RX1day являются шумными, но в целом отражают среднюю структуру осадков. Подобно рисунку 1, расположение WP в центре Великобритании находится в некоторой переходной зоне с учетом мировых различий 1,5 / 2 ° C.Среднее значение TX в центральной части Великобритании теплее, но TXx не сильно меняется на севере Великобритании (рис. 7b, d), а основное усиление осадков приходится на западное побережье (рис. 7f, h). Вернемся ко второму из наших графиков. два вопроса, станут ли текущие климатические рекорды «нормальными»? Хотя мы не анализировали модельные минимальные температуры, общий сдвиг в распределении температуры делает его крайне непохожим на то, что рекорд TNn будет превзойден (Таблица 7). Запись TXx находится в пределах диапазона распределения модели в 1.5/2 ° C и то, что составляет рекордное значение для климата 2015 года, будет примерно равным среднему ожидаемому значению TXx в конце 21-го века при воздействии RCP8.5. Значение записи RX1Day вообще не превышается ни при каком моделировании, и его исключительный характер в существующей записи WP предполагает, что маловероятно, что такую запись можно будет легко превзойти.

Добро пожаловать в национальный гольф-клуб Джека Фроста

Не забудьте надеть теплую водонепроницаемую одежду и зимние ботинки. Во всех тюбинговых парках запрещено ношение лыжных или сноубордических ботинок.Маунтин-Крик — Вернон Маунтин-Крик может похвастаться одним из крупнейших тюб-парков в регионе — да и в стране, если на то пошло — с 30 дорожками, разбросанными на площади более пяти акров, все они открыты для детей от 5 лет и старше и ростом не менее 42 дюймов. высокий. Трубки в нерабочее время также доступны для групп от 30 человек. Вы можете не только кататься на метро по склону, но и подниматься на нем!

Есть разные уровни роликов и шага, а это значит, что старшие дети могут немного проявить храбрость.Билеты продаются сеансами по два часа каждое. Big Boulder имеет 20 желобов и коврики с двумя ножками. Опять же, без возрастных требований, но клубни должны быть не менее 42 дюймов в высоту. Билеты продаются на трехчасовые сеансы, хотя дневные абонементы доступны в обоих парках. Снежный покров и уход за шерстью хороши, и двух из трех двойных черных обычно оставляют, чтобы подняться.

Пара трасс очень крутая, но это «ситуация с головной стеной в чаше». Крутые дороги не длинные и не устойчивые, но не заблуждайтесь, неровности, такие как «Белая молния», НЕ для промежуточных участников.У него нет ни стабильного поля, ни совсем тех условий, которые можно найти в соседнем Elk, но у него намного больше, чем у Elk для новичков и начинающих игроков среднего уровня.

Это действительно отличный горнолыжный курорт для среднего уровня. Близость к автомагистралям между штатами и Скрэнтон удобна, и многие люди согласны с этим, поэтому иногда в Montage бывает многолюдно. Но в целом подъемные линии обычно не проблема. Это одна из тех зон катания, где «синдром заднего двора» определенно играет роль. Но когда вы видите долину, засыпанную снегом, можете держать пари, что Montage будет переполнен.

Очень приятная атмосфера в «городских» горнолыжных зонах. Фирменный след: Белая молния. Решительно малолюдная, дружелюбная атмосфера.

Отправьте новый купон, чтобы помочь другим получить скидки!

Два отдельных холма, отлично подходящих для странника — пока он или она не достигли совершеннолетия. Нам грустно видеть близко гору Тон. Фирменный маршрут был «Краеугольный камень. Сезон: с середины декабря до середины марта. Ежегодный снегопад:». ЛЫЖИ: Небольшая зона катания на лыжах с красивым дизайном трасс и озером с эффектом снега.

На грани закрытия после унылого участка, местный предприниматель взял на себя управление и вновь открывается под названием Mount Pleasant в Эдинборо. Теперь мы должны убедиться, что он открыт. С красивыми трассами, отличным снегом, ухоженностью и семейной атмосферой есть много причин, чтобы кататься здесь на лыжах. Фирменный след: квакерский бег. СКИНЫ: Курортный комплекс с приличной зоной катания.

Название говорит само за себя. Ежегодный снегопад: 35 дюймов.

Часто бывает ледяной, или слякотной, или и того, и другого, Roundtop — одна из самых близких игр в городе для толпы Балтимора-Вашингтона, а по выходным она действительно привлекает толпу.С положительной стороны, у этого курорта действительно есть серьезные проблемы для серьезного лыжника. Во-вторых, снежная бригада достаточно профессиональна — они должны быть.

Если вы местный, либо двигайтесь на север, либо довольствуйтесь Roundtop. Чернокожие настолько хороши, насколько это возможно на лыжном курорте. Фирменный след: Gunbarrel. Годовое количество снегопадов: 45 дюймов.

Большой валун Jack Frost — Snow Tubing

Ski Sawmill, в свою очередь, находится в часе езды от Уильямспорта, так что это «где-то там».Что касается «курортов назначения», то на Лесопилке есть помещения для ночлега, рестораны и т. Д. Это настолько далеко от Вейла, насколько может быть горнолыжный курорт, но для начинающих семей с ограниченным бюджетом это хорошо. Всем нравится Лесопилка. С нашей точки зрения, приятно видеть, как горнолыжный курорт говорит правду о своей площади, пригодной для катания на лыжах. Фирменная тропа: Buzzsaw.

Snow Tubing;
Щелкните ссылку ниже, чтобы купить билеты…!
Как Verizon Media и наши партнеры улучшают качество рекламы!
Фирменное наименование!
ЧАСТО ЗАДАВАЕМЫЕ ВОПРОСЫ;
Эти похожие купоны!

Сезон: с конца ноября до конца марта.Мы говорили о толпе? Как небольшие горы, Семь источников красиво простираются вдоль хребта, предлагая путешественникам много разнообразия. Здесь тоже будет все в порядке, когда условия «хорошие» и трассы открыты. Точно так же и у новичка все в порядке. Эй, это большой курорт, недалеко от города Питтсбург. Если вы хотите легендарного катания на лыжах, посетите Семь источников в будний день после снегопада.

Путеводитель по горнолыжным курортам Пенсильвании — очень полный

Цифры выше — предоставленные курортом — кажутся весьма завышенными.Фирменный маршрут: Кортина. Ежегодный снегопад: 50 дюймов. Обратите внимание, что даже в многолюдном городе Шони отлично справляется с перемещением вещей. Катание на лыжах ориентировано на новичков и сильных блюз. Как недорогой курорт, он выполняет похвальную работу. немного скучно. Остальным он понравится, как и небольшая гора. Как правило, хорошее место для новичков, так как здесь есть большая отдельная зона с парой подъемников для развития этих навыков езды на лифте. Когда вы бронируете через нас вы по-прежнему получаете гарантию их самой низкой цены, а мы получаем несколько долларов.

Спасибо, что помогли сохранить Trekaroo бесплатным. Это отличный возраст для выхода на гору, когда у детей есть интерес и способность осваивать новые навыки.

Формы зонирования. Комитет по благоустройству. Жилища Комитета по благоустройству — Повестка дня заседания Комиссии по отдыху на декабрь. Архив протоколов заседаний рекреационной комиссии. Повестки дня заседаний комиссии Shade Tree. Комиссия по плавательному бассейну. Повестки дня заседаний плавательного бассейна. В отделах :. Управление чрезвычайными ситуациями. Финансовое управление.

Купоны и промокоды Jack Frost & Big Boulder Poconos Resorts 12222

Любителям это покажется лишь умеренно интересным; остальные из нас будут полностью наслаждаться Blue при разумных условиях.Приятная атмосфера, легкие трассы, сложные условия. SKInny: много сноубордистов, много людей, много старых подъемников. 10 популярных горнолыжных курортов, на которых легко летать. Цены на билеты на подъемники Jack Frost предоставляются OnTheSnow или напрямую на горнолыжном курорте, который несет ответственность за их точность. В горах расположились несколько причудливых городков с антикварными магазинами и галереями. Название говорит само за себя. Это все вдоль хребта jack frost big boulder coupons. Сезон: обычно с середины декабря до середины марта.Все возраста. На грани закрытия после того, как мрачный участок местного предпринимателя взял на себя и вновь открывается под названием Mount Pleasant в Эдинборо.

Городской суд. Совет по планированию. Общественные работы.

Фреймворк для использования искусственных нейронных сетей для очистки воды: разработка и применение | Водоснабжение

Общая цель настоящего исследования состояла в том, чтобы использовать ИНС для определения оптимальной дозы озона, необходимой для оптимального соответствия нормативным требованиям для ДАД в системе распределения питьевой воды.К сожалению, из-за ограниченного набора данных, доступного для качества воды в системе распределения, соответствующие сети распределения ANN не могли быть разработаны и использованы для определения оптимального добавления озона для эффективного контроля образования HAA. Однако ИНС обработки можно использовать для определения оптимальных доз озона, чтобы минимизировать затраты на эффективную УФ-дезинфекцию.

Часть набора данных, используемая для проверки ИНС обработки, использовалась для оценки дозы озона, необходимой для поддержания целевого уровня УФТ обработанной воды.Были рассмотрены различные целевые UVT обработанной воды в диапазоне от 86% до 96% (что соответствует диапазону UVT, наблюдаемому в наборах данных для обучения и проверки). Смоделированные дозы сравнивались с фактически примененными дозами (рис. 8). Для анализа учитывались только дозы озона в диапазоне тех, которые использовались для обучения и проверки модели ИНС (т. Е. 1,0–3,0 мг / л).

Без установленных границ прогнозируемой дозы озона модель показала бы, что в некоторых случаях озон не требовался для достижения целевого уровня УФТ для очищенной воды.С установленными границами концентрации озона, предсказанные ИНС, показали, что для поддержания постоянного УФТ обработанной воды добавление озона во входящий поток должно быть переменным. Напомним, что озон в настоящее время добавляется пропорционально обрабатываемому потоку для достижения постоянной концентрации во входящем потоке, в то время как ИНС учитывают сложное взаимодействие между изменяющимися характеристиками сырой воды, потреблением озона и тем, как они влияют на ΔUVT и UVT обработанной воды. Как обсуждалось ранее, ожидалось, что озон постоянно добавлялся в избытке или озон не добавлялся по сравнению с тем, что требуется для оптимального соответствия нормативным требованиям для ДАД в системе распределения.

Был проведен анализ для оценки затрат на эксплуатацию и техническое обслуживание (O&M) с различными целевыми UVT очищенной воды. Для анализа было принято, что затраты на эксплуатацию и техническое обслуживание озона составляют 2,0 доллара США за штуку ₃ кг (Mundy и др. 2018) и что годовые затраты на эксплуатацию и техническое обслуживание УФ-дезинфекции могут быть оценены на основе UVT, как описано в Cotton et al. (2001). На основе общих годовых оценок затрат на ЭиТО была оценена экономия, связанная с внедрением контроля дозирования озона с использованием ИНС (т.е. разница между расчетными затратами для фактических и прогнозируемых (рис. 9). Анализ чувствительности с уровнем неопределенности 10% был проведен для анализа того, как на прогнозируемую экономию повлияет изменение предполагаемых годовых затрат на ЭиТО для озона и УФ-дезинфекции (Рисунок 9).

Анализ показывает, что целевая УФТ очищенной воды приблизительно на 92% сводит к минимуму затраты на эксплуатацию и техническое обслуживание УФ-дезинфекции и озонирования (т. Е. Максимальную экономию).Установленное значение УФТ для 92% очищенной воды примерно на 1,5% ниже, чем среднее измеренное значение УФТ для очищенной воды в течение периода исследования (93,5%).

На основании анализа, общая экономия на ЭиТО порядка 65 000 канадских долларов может быть достигнута в год, если использовать ИНС для поддержания целевого UVT очищенной воды приблизительно 92% на CWTP. Анализ чувствительности показывает, что, если затраты на озонирование выше, чем предполагалось, экономия, связанная с внедрением ИНС, увеличится, в то время как, если затраты на озонирование ниже расчетных, экономия от внедрения ИНС уменьшится.Кроме того, если затраты на УФ-дезинфекцию выше, чем первоначально предполагалось, экономия, связанная с внедрением ИНС, уменьшится, в то время как, если затраты на УФ-дезинфекцию ниже, чем предполагалось, экономия от внедрения ИНС увеличится. Эти результаты были ожидаемыми, потому что ИНС предсказала, что в среднем концентрация озона должна быть ниже, чем в настоящее время, и, поскольку затраты на УФ-дезинфекцию обратно пропорциональны УФТ воды (Cotton et al. 2001), более высокие затраты с УФ-дезинфекцией, чем в современной практике.

Ожидается, что помимо существенной экономии затрат на ЭиТО использование ИНС для контроля дозы озона принесет пользу эксплуатации:

Устройства прямого сердечного сжатия — Скачать PDF бесплатно

ОБЗОР

Устройства прямого сердечного сжатия Мехмет К. Оз, доктор медицинских наук, Джон Х. Артрип, доктор медицинских наук, и Дэниел Бурхофф, доктор медицины, доктор философии. Вспомогательные устройства для желудочков, используемые в клинической практике для оказания помощи при сердечной недостаточности, требуют прямого контакта между устройством и кровью пациента.Тромбоэмболические явления, необходимость в антикоагулянтах, гемолиз, иммунные реакции и инфекции в значительной степени способствуют заболеваемости и смертности от этих устройств. Сдавливание ослабленного сердца с эпикардиальной поверхности, прямое сжатие сердца (DCC) может обеспечить поддержку желудочков и избежать взаимодействия между кровью и инородной поверхностью. В этой статье рассматривается физиология компрессии эпикарда и современный прогресс в области устройств для механической компрессии. J. Пересадка легкого сердца 2002; 21: 1049–1055.

Лечение терминальной стадии болезни сердца остается серьезной клинической проблемой, а набор доступных медицинских методов лечения несколько ограничен и часто неэффективен, что требует механической желудочковой помощи. Хотя доступны различные вспомогательные устройства для желудочков, большинство из них требует прямого контакта с кровью пациента; таким образом, тромбоэмболические явления и необходимость антикоагуляции, гемолиза и иммунных реакций являются постоянными проблемами. Соответственно, возобновился интерес к разработке методов поддержки кровообращения путем сжатия ослабленного сердца с его эпикардиальной поверхности, то есть прямого сжатия сердца (DCC).Понимание влияния DCC на насосную функцию желудочков было получено на раннем этапе использования биомеханической компрессионной терапии, такой как динамическая кардиомиопластика. Эти хирургические процедуры физически обертывают скелетные мышцы пациента вокруг больного сердца и стимулируют электронное обертывание мышц, чтобы они сокращались с собственным сердечным сокращением. От отделения хирургии отделения кардиоторакальной хирургии и отделения медицины отделения физиологии кровообращения Колледжа врачей и хирургов Колумбийского университета, Нью-Йорк.Поступила 26 декабря 2001 г .; отредактировано 26 февраля 2002 г .; принято 3 апреля 2002 г. Запросы на переиздание: д-р Мехмет К. Оз, отделение хирургии, отделение кардиоторакальной хирургии, Колледж врачей и хирургов, Колумбийский университет, MHB 7-435, 177 Fort Washington Avenue, New York, New York 10032 Телефон: 212-305-4434. Факс: 212-305-2439. Электронная почта: [электронная почта защищена] Авторские права © 2002 Международное общество трансплантации сердца и легких. 1053-2498 / 02 / $ — см. Лицевую часть PII S1053-2498 (02) 00482-5

После хирургической процедуры происходит 2-недельное восстановление, которое позволяет образоваться спайкам между сердцем и скелетными мышцами, а затем 6-недельный период предварительной подготовки перед тем, как скелетные мышцы задействуются для поддержки желудочков.Высокая периоперационная смертность, связанная с этой процедурой, и длительный период предварительной подготовки практически исключили пациентов с сердечной недостаточностью класса IV Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA), которые являются группой пациентов, которые больше всего выиграют от желудочковой помощи. Кроме того, использование миостимулятора исключает использование кардиостимуляторов и внутренних сердечных дефибрилляторов (ICD) у пациентов, склонных к нарушениям проводимости и желудочковым аритмиям. По этим причинам исследователи обратились к компрессионным устройствам с механическим приводом.Основные компоненты этих устройств состоят из приводной системы сжатия, электрокардиографического (ЭКГ) датчика / цифрового контроллера и эпикардиальной «чашки» или «манжеты». Адаптации к этим отдельным компонентам были использованы для разработки устройств специально для сердечно-легочной реанимации, острой поддержки желудочков и долгосрочной поддержки желудочков. Хотя в настоящее время нет устройства для клинического использования, в настоящее время разрабатывается и оценивается несколько систем. Несмотря на различия между различными системами поддержки, физиологические принципы, регулирующие механизм их действия, по существу одинаковы.

ФИЗИОЛОГИЯ ПРЯМОГО СЖАТИЯ СЕРДЦА Наше понимание влияния DCC на механику желудочков основано на исследованиях, выполненных с использованием 1049

1050

Oz et al.

Журнал трансплантации сердца и легких Октябрь 2002 г.

добавить к желудочковому давлению, создаваемому сокращающимся миокардом. Это может быть ясно продемонстрировано в экспериментальных условиях, когда объем желудочков остается фиксированным (т.е. изоволюмические сокращения), так что сила сокращения желудочков легко индексируется увеличением желудочкового давления.В этих условиях давление, измеренное внутри полости желудочка, равно сумме давления, создаваемого сокращающимся миокардом (обычно называемого трансмуральным давлением), плюс давление, приложенное к поверхности сердца. Это проиллюстрировано на рисунке 1 и может быть выражено математически как: РИСУНОК 1 Давление в левом желудочке, полученное из изолированного сердца собаки, подвергающегося синхронизированному сжатию эпикарда в условиях изоволюмического выброса. Давление, измеренное внутри полости желудочка, Pic (V, t), представляет собой сумму трансмурального желудочкового давления, Ptm (V, t), плюс давление сжатия эпикарда, PDCC (t).изолированное собачье сердце, помещенное в камеры сжатия, уровни давления которых могут изменяться синхронно с сокращением сердца.1–4 Результаты этих исследований показали, что чистая насосная способность желудочков может быть увеличена за счет внешнего давления, так что силы, прикладываемые к поверхности сердца

РИСУНОК 2 Влияние DCC на ESPVR и EDPVR левого желудочка изолированного сердца собаки в условиях изоволюмического выброса. При давлении сжатия, которое не зависит от размера желудочка, PDCC (t), ESPVR просто смещается вверх без изменения наклона; однако при давлении сжатия, которое зависит от размера желудочка, PDCC (V, t), наклон линии значительно увеличивается с небольшим изменением точки пересечения оси объема.Эпикардиальная компрессия не влияет на EDPVR.

Pic (V, t) ⫽ Ptm (V, t) ⫹ PDCC (t)

(1)

где Pic (V, t) — внутрикамерное желудочковое давление, Ptm (V, t) трансмуральное желудочковое давление и PDCC (t) давление, создаваемое прямым сердечным сжатием. Применяя этот принцип к серии фиксированных желудочковых объемов, становится очевидным, что DCC сдвигает соотношение конечного систолического давления к объему (ESPVR) вверх на величину, связанную с давлением сжатия (Рисунок 2).В случае биологических обертываний скелетная мышца, используемая для сжатия эпикарда, подвержена изменению длины миофибриллы и натяжения; по этой причине давление сжатия (PDCC) зависит от размера желудочка. По мере того как размер желудочка изменяется с объемом наполнения, соотношение длина-натяжение миофибрилл мышечной оболочки изменяется, таким образом изменяя величину силы сжатия, передаваемой эпикарду.5 ESPVR сердца, которому помогает обертывание скелетных мышц, показано с помощью пунктирная линия на рисунке 2.Наклон линии (называемый конечной систолической эластичностью, Ees) значительно увеличивается при небольшом изменении точки пересечения оси объема (Vo) .6,7 При использовании механических компрессионных устройств PDCC (t) не зависит от размера желудочка. , так что величина давления сжатия, прикладываемого к эпикардиальной поверхности сердца, одинакова независимо от объема желудочка. В этих условиях ESPVR просто сдвигается вверх от базовой линии на величину, равную PDCC (t). Наклон линии не изменился, но значение Vo уменьшилось.4 Это показано пунктирной линией на рисунке 2. С компрессионной камерой, использованной в эксперименте ex vivo на собачьем сердце, улучшение систолической функции достигается без влияния на диастолическую функцию желудочков. 4 Это проиллюстрировано на рисунке 2 аналогичным Обтекания EDPVR для сердца с вспомогательной и без посторонней помощи. К сожалению, биологические обертки и устройства для механического сжатия, разработанные для использования in vivo, могут иметь

Журнал трансплантации сердца и легких Том 21, номер 10

РИСУНОК 3 Влияние DCC на взаимосвязь между потреблением O2 миокарда и внешней работой.DCC уменьшает наклон зависимости mVO2 – PVA с небольшим влиянием на точку пересечения y. небольшое влияние на диастолические свойства желудочков. Влияние на диастолические свойства непоследовательно наблюдалось различными исследователями, но когда оно присутствует, оно вызывает небольшие сдвиги EDPVR влево. 8,9 Эти сдвиги EDPVR указывают на повышенную жесткость камеры, которая требует более высокого давления наполнения для получения того же самого. объем предварительной загрузки. Важно отметить, что этот эффект наблюдался как с активным сжатием, так и без него, предполагая, что фактическая фиксация этих бинтов / устройств на сердце объясняет этот диастолический эффект.Мышечные обертывания также могут снизить скорость спада диастолического давления (отрицательное dP / dtmax) и увеличить постоянную времени (␶) для релаксации желудочков, чего не наблюдалось при использовании устройств механического сжатия.9,10 Это, вероятно, связано с относительно медленный период расслабления скелетных мышц по сравнению с сердечными мышцами и тот факт, что сердце находится в пределах мышечной оболочки. Чистый эффект обертывания желудочков и компрессионных устройств на диастолические свойства желудочков может привести к уменьшению предварительных нагрузок желудочков и потенциально ограничить степень получаемого увеличения выброса.4,7,8 Поскольку DCC увеличивает ESPVR с небольшим влиянием на EDPVR, общий эффект заключается в увеличении площади давление-объем (PVA), заключенной между этими двумя кривыми. Эта область отражает внешнюю работу сердца и обычно коррелирует с потреблением кислорода миокардом (мВО2). Однако при механическом сжатии с поверхности эпикарда PVA увеличивается, но mVO2 не изменяется.3,4 Это показано на рисунке 3 как значительное уменьшение наклона зависимости mVO2 – PVA с небольшим влиянием на точку пересечения y. .Изменения наклона зависимости mVO2 – PVA

Oz et al.

1051

РИСУНОК 4 Влияние DCC на соотношение давление-объем (PV) в левом желудочке изолированного сердца собаки в смоделированных компьютером физиологических условиях выброса. При применении DCC ESPVR смещается вверх от базовой линии (пунктирная линия против сплошной). В условиях, когда не изменяется ни объем предварительной нагрузки, ни сопротивление после нагрузки, новое соотношение PV увеличивается со значительным увеличением рабочего объема (пунктирный против сплошной петли PV).Однако объем предварительной нагрузки уменьшается во время DCC, и контур PV смещается влево (пунктирный контур PV), тем самым уменьшая увеличивающее влияние DCC на ударный объем. Наблюдаемые с DCC не отражают эффекты на свойства миокарда, а скорее увеличивают способность генерировать чистое давление в отсутствие влияния на внутренние свойства миокарда. В отличие от изоволюмических сокращений с физиологическими условиями выброса, аналогичными тем, которые встречаются in vivo, повышенная насосная способность желудочка при эпикардиальной компрессии проявляется не только в увеличении конечного систолического давления, но также в увеличении ударного объема.4,8 Однако объемы перед нагрузкой уменьшаются в результате увеличения желудочкового выброса, и по этой причине степень увеличения давления и ударного объема, ожидаемая DCC, снижается до того, что можно было бы ожидать, если бы объемы перед нагрузкой оставались постоянными. Это было предсказано в исследованиях с использованием изолированных сердец, выбрасываемых против смоделированной компьютером физиологической системы постнагрузки, 4 и наблюдалось in vivo в исследованиях с использованием мышечных обертываний и компрессионных устройств.7,8 Кривые давление – объем, иллюстрирующие сдвиг предварительной нагрузки, который происходит с увеличенной прокачивающей способностью ДКК показаны на рисунке 4.Эти наблюдения можно объяснить использованием современных теорий вентрикулоартериальной связи, 11 предсказывающих, что величина увеличения ударного объема будет зависеть от

1052

Oz et al.

Журнал трансплантации сердца и легких Октябрь 2002 г.

РИСУНОК 6 График, показывающий изменение ударного объема, производимого DCC, в зависимости от степени сердечной недостаточности, выраженной в процентах от нормального исходного значения. Коэффициент корреляции 0,82.

РИСУНОК 5 Влияние DCC на взаимосвязь между ударным объемом и сократимостью желудочков для трех различных предварительных нагрузок (EDV 30, 40 и 50 мл) для взрослого кобеля весом 24 кг.Сократимость желудочков индексируется как значение Ees, которое у здорового взрослого кобеля составляет примерно 8 мм рт. Ст. / Мл. Сплошные линии: EDV 50 мл; пунктирные линии: EDV 40 мл; штрихпунктирные линии: КДО 30 мл. Графики: (A) ударный объем против Ees; (B) изменение ударного объема («ударный объем» ход

, исходное сократительное состояние миокарда, исходное сопротивление после нагрузки и степень сдвига до нагрузки, вызванного PDCC (t) .4 Взаимосвязь между этими параметрами дополнительно суммирована в Рисунок 5 с помощью компьютерного моделирования кровообращения у собак.Пунктирная линия на рисунке 5A показывает, как ударный объем изменяется в зависимости от сократительного состояния (обозначенного как Ees) при фиксированной предварительной нагрузке и фиксированной остаточной нагрузке. Сплошная линия вверху показывает, как DCC повлияет на эту взаимосвязь, если предположить, что предварительная нагрузка не изменилась. Однако по мере уменьшения предварительной нагрузки эта кривая смещается вниз, как показано штриховыми и пунктирными линиями. Графики, отображающие величину увеличения ударного объема (выраженную в абсолютном и относительном выражении на рис. 1B и C, соответственно) формально иллюстрируют два фундаментальных аспекта физиологии компрессии эпикарда.Во-первых, уменьшение предварительной нагрузки замедлит увеличение ударного объема и может даже привести к его уменьшению при более высоких исходных уровнях сократимости. Во-вторых, степень увеличения эффективного сократительного состояния желудочков, обеспечиваемая DCC, является функцией исходного сократительного состояния. Значительное увеличение ударного объема может быть достигнуто только при слабом сердце (≥40% в норме). Эти принципы были проверены in vivo с использованием устройства для эпикардиальной компрессии с постоянным давлением и собачьего объема (DCC) по сравнению с Ees; и (C) процентное увеличение ударного объема [% ходовой объем ⫽ ((ударный объем DCC ⫺ базовый ударный объем) / базовый ударный объем) ⫻ 100] по сравнению с Ees.Ударный объем DCC — это ударный объем с DCC, а базовый ударный объем — это базовый ударный объем.

The Journal of Heart and Lung Transplantation Volume 21, Number 10

Модель сердечной недостаточности, в которой ступенчатые уровни сердечной недостаточности были достигнуты с помощью микроэмболизации коронарной артерии.8 График на рисунке 6 взят из экспериментов in vivo и аналогичен к графику на Рисунке 5B. Полное объяснение физиологии DCC еще сложнее. DCC одинаково влияет на оба желудочка, и был исследован только один желудочковый анализ.Собственная сократительная сила и сопротивление после нагрузки для правого желудочка (ПЖ) ниже, чем для левого желудочка (ЛЖ). Таким образом, влияние DCC на правый желудочек пропорционально больше.4,8 Поскольку в установившихся условиях ударный объем должен быть примерно одинаковым для обоих желудочков, влияние DCC на правый желудочек не может трансформироваться в больший ударный объем для правого желудочка. RV, чем LV. Степень увеличения сердечного выброса будет зависеть от эффектов DCC на неравномерную насосную способность и сосудистое сопротивление LV и RV, так что конечная степень давления сжатия, которое будет использоваться, будет критически зависеть от влияния DCC на RV. .8 То есть увеличение давления сжатия до значений, превышающих те, которые требуются для полного опорожнения RV, скорее всего, не приведет к дальнейшему увеличению выходных сигналов LV.

УСТРОЙСТВА СЕРДЕЧНО-ЛЕГОЧНОЙ РЕАНСИТАЦИИ В 1965 году Анштадт и соавторы представили устройство для компрессии эпикарда, которое могло проводить эффективную и длительную сердечно-легочную реанимацию (СЛР) .12 Это устройство, известное как чашка Анштадта, представляет собой чашку эллиптической формы, которая надевается как на правую, так и на левую сторону камеры желудочков. Он имеет полужесткую внешнюю оболочку и надувную внутреннюю диафрагму, которая передает силу сжатия сердцу.Давление вакуума (⬃70 мм рт. Ст.) На верхушке сердца используется для прикрепления чашки к сердцу и предотвращения перемещения устройства. Положительное и отрицательное давление создается внутри внутренней диафрагмы с помощью системы пневматического привода, способной создавать импульсное давление. Поскольку внутренняя диафрагма плотно прилегает к поверхности эпикарда, устройство может обеспечивать диастолическую декомпрессию, а также компрессию эпикарда. Частота цикла фиксирована, но ее можно отрегулировать для обеспечения желаемой скорости сжатия.Однако по техническим причинам устройство не было разработано для выполнения эпикардиальных компрессий, синхронизированных с собственным сердечным сокращением. Хотя была предпринята попытка асинхронной желудочковой помощи, повышенная частота нарушений ритма и возможность повреждающего воздействия на миокард ограничивают исследования применимости этого устройства в области СЛР.

Oz et al.

1053

УСТРОЙСТВА, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЕ ДЛЯ ПОМОЩИ ОСТРОГО ОТКАЗА СЕРДЦА Устройство поддержки желудочков, предназначенное для стабилизации сердца с острой сердечной недостаточностью, должно быть простым в применении в нестабильной ситуации, свободно регулируемым для оптимизации желудочкового выброса в различных клинических условиях, обеспечивать полное кровообращение. поддержка в случае остановки сердца и возможность легкого удаления после восстановления сердечной недостаточности.Одной из разрабатываемых систем, отвечающих этим требованиям, является система CardioSupport (Cardio Technologies, Inc, Pine Brook, NJ). Устройство имеет структуру, напоминающую манжету, которая размещается вокруг сердца между предсердно-желудочковой канавкой и верхушкой. Отрицательное давление (200 мм рт. Ст.), Прикладываемое к верхушке сердца, используется для фиксации устройства к сердцу. Компрессионный пузырь манжет ограничивает оба желудочка вокруг основания и надувается синхронно с естественным сокращением сердца при обеспечении сердечной поддержки.Внутри вакуумного уплотнения есть две мелкоячеистые электродные ленты, которые обеспечивают надежный источник ЭКГ, необходимый для измерения времени накачивания и выпуска компрессии. Электроды также можно использовать для дефибрилляции. При надувании манжеты стенки желудочков сжимаются, вытесняя кровь из желудочков. Спускание воздуха из манжеты позволяет желудочкам наполняться кровью, которая выталкивается во время следующего надувания манжеты. Сила сжатия обеспечивается воздушным компрессором и регулируется с помощью компьютерной консоли и электромеханического троса, который регулирует величину, частоту и продолжительность давления сжатия, которое должно быть доставлено к эпикарду.Индивидуальные параметры можно легко настроить, чтобы оптимизировать желудочковую помощь в соответствии с потребностями пациента. В режиме CPR система надувает и спускает воздух из манжеты с фиксированной скоростью, которая может быть изменена оператором.

УСТРОЙСТВА, РАЗРАБОТАННЫЕ ДЛЯ ДОЛГОСРОЧНОЙ ЖЕЛУДОЧНОЙ ПОДДЕРЖКИ Устройства для сжатия эпикарда, разработанные для хронической поддержки желудочков, должны быть надежными и портативными. Heart Booster (Abiomed, Inc, Данверс, Массачусетс) находится в стадии разработки с конструктивными спецификациями, подходящими для долгосрочной поддержки желудочков.Интерфейс между сердцем и компрессионной системой также представляет собой «манжетоподобное» устройство, состоящее из нескольких отдельных параллельных компрессионных трубок, добавленных последовательно, чтобы покрыть обе желудочковые камеры. Эти трубки образуют полосу вокруг основания сердца и прочно прикрепляются к эпикарду с помощью хирургического клея. Номер

1054

Oz et al. В устройстве

используется система гидравлического привода, которая заполняет и опорожняет компрессионные трубки жидкостью в течение соответствующих полупериодов.Эти приводные системы могут быть относительно небольшими, работать на электричестве и могут работать от перезаряжаемой батареи, что делает этот тип устройства хорошо подходящим для длительного использования.

ХИРУРГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА Применение любого из трех описанных компрессионных устройств относительно просто и может быть достигнуто либо посредством левой торакотомии, либо посредством средней стернотомии. Размер чашки Anstadt или системы CardioSupport определяется главным образом визуальным осмотром; однако оценки, основанные на размере сердечного силуэта на рентгеновском снимке грудной клетки или даже измерении окружности сердца у основания, оказались полезными.Чашка Анштадта и система CardioSupport имеют размер по внутреннему диаметру и производятся с шагом от 5 до 10 мм. Внутренний диаметр должен быть примерно такого же диаметра, как у естественного сердца, обеспечивая достаточно места для адекватного размещения обоих желудочков. Линия всасывания и приводные линии выводятся из груди под грудью или переднебоковой стороной через межреберный промежуток, избегая перегибов в любой из линий. Перед закрытием грудной клетки компрессия инициируется и с помощью системы CardioSupport или Heart Booster синхронизируется с собственным сердечным сокращением, устанавливая начало давления сжатия устройства, приблизительно равное началу повышения желудочкового давления.В лаборатории на животных это достигается с помощью датчика давления левого желудочка; однако катетер Свана-Ганца, введенный в камеру правого желудочка, должен обеспечить хорошее приближение и является возможным клинически. Величина компрессионного давления медленно увеличивается до тех пор, пока сердечный выброс не станет максимальным. Трубки в грудную клетку помещаются и грудная клетка закрывается с помощью устройства, активно помогающего сердцу. №

КЛИНИЧЕСКИЙ ОПЫТ С УСТРОЙСТВАМИ ДЛЯ СЖАТИЯ ЭПИКАРДА На сегодняшний день не проводилось клинических исследований с использованием устройства для сжатия эпикарда для облегчения собственного сокращения желудочков.Система CardioSupport и Heart Booster все еще находятся в стадии разработки. Таким образом, значительная часть клинического опыта компрессии эпикарда связана с работой, выполняемой на остановленном сердце с использованием чашки Анштадта. Самая большая серия пациентов, изучаемых с помощью этого устройства, представляла собой отчет, сделанный на 12 пациентах.13 Средний возраст группы составлял 48,2 ± 4,2 года при соотношении женщин: мужчин 5: 7. Среднее время от засвидетельствованной остановки сердца до устройства

The Journal of Heart and Lung Transplantation October 2002

заявка составляла 81 ± 9 минут, хотя время от разреза кожи до наложения устройства, как сообщается, составляло ± 2 минуты.Систолическое и диастолическое артериальное давление составляло в среднем 78 ± 4 и 41 ± 4 мм рт. Ст., Соответственно, при среднем сердечном выбросе 3,14 ± 0,18 л / мин, полученном для периодов от 25 минут до 18 часов (в среднем 228 ± 84 минуты). Чашку Анштадта сравнивали с массажем сердца на открытом воздухе (OCCM), выполняемым при аналогичной частоте сжатия, и он был более эффективным, чем OCCM, при повышении артериального давления (улучшение на 65%) и сердечного выброса (улучшение на 190%). Из 12 зарегистрированных пациентов 4 были успешно дефибриллированы; однако 2 умерли от сердечной недостаточности в течение первого часа после реанимации и 2 умерли от сердечной недостаточности и дыхательной недостаточности в течение 2 дней после реанимации.У 1 пациента устройство обеспечивало адекватную поддержку кровообращения, позволяющую избежать экстренного искусственного кровообращения, но позже пациент умер от инфаркта миокарда. Осложнений, связанных с механической СЛР, не было; однако осложнения, связанные с ОККМ, включали разрыв сердца во время перикардиотомии и разрыв желудочка. Также важным, но не включенным в исследование, был отчет об успешной поддержке кровообращения с чашкой Анштадта в течение 56 часов с успешным переходом к трансплантации, и пациент остается жив и здоров при последующем наблюдении в течение 1 года.14

ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ОГРАНИЧЕНИЯ Возможные повреждающие эффекты прямого механического сжатия миокарда вызывают озабоченность при использовании этих или любых других подобных поддерживающих механизмов. Наиболее очевидными проблемами являются ушибы миокарда, учащение аритмий и ишемия миокарда. Ранний опыт использования чашки Anstadt продемонстрировал гистологические доказательства нетрансмуральных экхимозов, присутствующих на эндокардиальной поверхности правого желудочка и легочного оттока, когда устройство использовалось для компрессии эпикарда у собак в течение периодов от 6 до 24 часов.15,16 Когда продолжительность компрессии была увеличена до 3,5–20 месяцев, гистологическое исследование выявило небольшой рубец в той же области. Важно отметить, что эти исследования проводились с компрессиями, асинхронными с собственным сердечным сокращением, что увеличивало вероятность повреждения миокарда. Небольшой ушиб миокарда и отек в результате прямого механического сжатия могут быть неизбежны, но меры предосторожности, такие как точная регулировка синхронизации сокращения устройства с сокращением желудочков, предотвращение чрезмерного сжатия, вероятно, уменьшат эти потенциальные повреждающие эффекты.Поскольку механическая сила может вызвать деполяризацию миокарда, DCC может увеличивать частоту ритмий ar-

The Journal of Heart and Lung Transplantation Volume 21, Number 10

. Антиаритмические препараты, такие как лидокаин или амиодарон, и правильное регулирование электролитов будут важны для контроля частоты аритмий. В отличие от кардиомиопластики, эти устройства не являются противопоказаниями к постоянным кардиостимуляторам или ИКД, которые можно использовать при необходимости. Возможность ишемии миокарда также вызывает беспокойство, особенно потому, что компрессия коронарных артерий теоретически может препятствовать кровотоку.Перфузия миокарда в ЛЖ происходит в основном во время диастолы, когда силы сжатия уменьшаются до нуля, что делает маловероятным существенное нарушение естественного коронарного кровотока. Перфузия миокарда в правый желудочек происходит как во время диастолы, так и во время систолы, и может вызывать большее беспокойство. Однако повышенное артериальное давление, полученное с помощью DCC, должно ограничить любое неблагоприятное воздействие на коронарный кровоток и может фактически улучшить его. Использование устройств DCC на сердце с обходными трансплантатами может быть более проблематичным.Из-за своего эпикардиального расположения шунтирующие трансплантаты могут быть более восприимчивыми к потенциальному неблагоприятному влиянию DCC на кровоток, а тонкий сосудистый анастамоз может не выдерживать дополнительных сил DCC. Однако до сих пор не было проведено никаких исследований, подтверждающих это.

СООБРАЖЕНИЯ НА БУДУЩЕЕ Несмотря на то, что в области компрессии эпикарда был проделан значительный объем работы, потенциал этого метода терапии для пациентов с сердечной недостаточностью в терминальной стадии еще не реализован.Однако с улучшением конструкции устройства и нашим пониманием физиологии компрессии эпикарда такие устройства могут обеспечить важный будущий способ поддержки желудочков. В отличие от нынешних временных вспомогательных устройств, устройства DCC очень просты в применении, обеспечивают бивентрикулярную поддержку и позволяют избежать необходимости в антикоагуляции. Наиболее незамедлительно эти устройства будут применяться при острой сердечной недостаточности, когда они будут действовать для стабилизации сердца для трансплантации, обеспечения постоянной имплантации вспомогательного устройства LV (LVAD) или даже восстановления функции желудочков.Недавние исследования показали, что сердце может подвергаться «обратному ремоделированию» в результате длительной разгрузки желудочков с помощью традиционной поддержки LVAD.17 и что это сопровождается гистологическими и молекулярными изменениями, указывающими на восстановление функции желудочков. Традиционные методы поддержки желудочков обеспечивают механическую разгрузку; однако они не помогают с фактическим сокращением мышц, как сжатие эпикарда. Содействие укорочению миофибрилл может дать теоретические преимущества для восстановления желудочков.

Oz et al.

1055

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Кавагути О, Гото Й, Футаки С., Огоши Й, Яку Х, Суга Х. Механическое улучшение и экономия кислорода миокардом за счет синхронизированного динамического сжатия левого желудочка. J. Thorac Cardiovasc Surg 1992; 103: 573–81. 2. Кавагути О., Гото Ю., Футаки С., Огоши Ю., Яку Х., Шуга Х. Влияние динамического сжатия сердца на механику и энергетику желудочков. Роль размера и сократимости желудочков. J. Thorac Cardiovasc Surg 1994; 107: 850–9.3. Кавагути О, Гото Й., Оггоши Й., Яку Х., Мурасе М., Шуга Х. Динамическое сжатие сердца улучшает сократительную эффективность сердца. J. Thorac Cardiovasc Surg 1997; 113: 923–31. 4. Artrip JH, Wang J, Leventhal AR, Tsitlik JE, Levin HR, Burkhoff D. Гемодинамические эффекты прямого бивентрикулярного сжатия изучались в изоволюмических и выбрасываемых изолированных сердцах собак. Тираж 1999; 99: 2177–84. 5. Спотниц Х.М., Меркер С., Мальм-младший. Прикладная физиология прямой мышцы живота собаки: кривые сила-длина коррелируют с функциональными характеристиками «желудочка с приводом от прямой мышцы живота».»Возможность сердечной помощи. Trans Am Soc Artif Intern Org 1974; 20B: 747–55. 6. Аклог Л., Мерфи М.П., Чен С.Б., Смит В.Дж., Лоуренс Р.Г., Апплярд Р.Ф., Кон Л.Х. Кардиомиопластика правой широчайшей мышцы спины улучшает функцию левого желудочка за счет увеличения максимальной систолической эластичности (Emax). Тираж 1994 г., 90 (приложение II): 112–8. 7. Чо П. У., Левин Х. Р., Кертис В. Е., Цитлик Дж. Э., Динатале Дж. М., Касс Д. А., Гарднер Т. Дж., Кунель Р. У., Акер М. А.. Давление-объемный анализ изменений сердечной функции при хронической кардиомиопластике. Энн Торак Сург 1993; 56: 38–45.8. Artrip JH, Yi GH, Levin HR, Burkhoff D, Wang J. Физиологическая и гемодинамическая оценка неоднородного прямого сердечного сжатия. Тираж, 1999; 100 (приложение II): 236–43. 9. Корин В.Дж., Джордж Д.Т., Раковина Д.Д., Сантамор В.П. Динамическая кардиомиопластика резко ухудшает диастолическую функцию левого желудочка. J. Thorac Cardiovasc Surg 1992; 104: 1662–71. 10. Salmons S, Jarvis JC. Кардиомиопластика: основные вопросы. Кардиол Хрон 1990; 4: 1–7. 11. Sunagawa K, Maughan L, Burkhoff D, Sagawa K. Изучено взаимодействие левого желудочка с артериальной нагрузкой в изолированном желудочке собаки.Am J Physiol 1983; 245: H773–80. 12. Анштадт Г.Л., Блейкмор В.С., Бауэ А.Е. Новый инструмент для длительного механического массажа. Circulation 1965; 31 (Suppl II): 43. 13. Anstadt MP, Bartlett RL, Malone JP, Brown GR, Martin S, Nolan DJ, Oberheu KH, Anstadt GL. Прямое механическое срабатывание желудочков при остановке сердца у людей. Клиническое исследование осуществимости. Сундук 1991; 100: 86–92. 14. Лоу Дж. Э., Анштадт М. П., Ван Тригт П., Смит П. К., Хендри П. Дж., Планкетт М. Д., Анштадт Г. Л.. Первый успешный мост к трансплантации сердца с использованием прямого механического срабатывания желудочков.Ann Thorac Surg 1991; 52: 1237–45. 15. Anstadt MP, Tedder SD, Vander Heide RS, Tedder M, Hilleren DJ, Sostman HD, Reimer KA, Lowe JE. Сердечная патология после реанимационной поддержки кровообращения: прямое механическое срабатывание желудочков по сравнению с искусственным кровообращением. ASAIO J 1992; 38: 75–81. 16. Anstadt MP, Anstadt GL, Lowe JE. Прямое механическое срабатывание желудочков: обзор. Реанимация 1991; 21: 7–23. 17. Левин Х.Р., Оз М.К., Чен Дж. М., Пакер М., Роуз Э. А., Бурхофф Д. Обращение хронической дилатации желудочков у пациентов с кардиомиопатией терминальной стадии путем длительной механической разгрузки.Тираж 1995; 91: 2717–20.

Фенноскандинавское поднятие и геодинамика позднего кайнозоя: геологические данные по JSTOR

Abstract

История регистрации и интерпретации фенноскандинавского поднятия иллюстрирует основную историю наук о Земле, поскольку полученные результаты оказали (и до сих пор имеют) непосредственное влияние на интерпретацию большого количества фундаментальных проблем наук о Земле. Благодаря работе Де Гира в 1888 году было установлено изостатическое происхождение ледников.Фенноскандия стала классическим районом ледниковой изостазии, и записи ее уровня моря использовались для геофизических расчетов свойств и динамики мантии и коры. Кривая уровня моря, полученная Лиденом (1938 г.) по водной шкале от центра поднятия, предоставила исключительно хорошо датированную запись. С помощью радиоуглеродного метода записи береговых линий и кривых смещения уровня берега были радикально улучшены, обеспечивая совершенно новую основу для понимания геодинамики Фенноскандинавского поднятия и геофизической интерпретации полученных данных.Это особенно верно в сочетании с данными многократного нивелирования, полученными в течение последних десятилетий для Финляндии и Швеции. Позднекайнозойские многолетние движения Фенноскандинавского щита характеризуются значительным опусканием. Постледниковое поднятие Фенноскандии сложное (экспоненциальный и линейный факторы) и вызвано двумя различными механизмами. Общее абсолютное движение по отношению к последнему оледенению представляет собой эллиптический подъёмный конус высотой 830 м, окруженный проседанием высотой 170 м.Масса в конусе поднятия и в просадочной части составляет 1: 1 с объемом 0,7 x 10⁶ км3. Исчезновение / появление массы свидетельствует о переносе массы в астеносфере с низкой вязкостью. Установлены следующие свойства и условия астеносферы: 1-10 x 10² Пуаз по вязкости, 3 x 10⁻¹⁴ — 3 x 10⁻¹⁶ сек по скорости деформации, 0,7% от температуры плавления, 3 мм в зерне. размер, а 5 — напряжение 0,4 бар. Основное изостатическое поднятие (экспоненциальный фактор) происходит из процесса астеносферного дислокационного скольжения, который в начале-середине голоцена превратился в процесс диффузионного ползучести.Текущий коэффициент линейного подъема (определенный за последние 8000 лет), по-видимому, происходит из-за движений мезосферы при следующих приблизительных условиях: 0,6% температуры плавления, 2 x 10²² Пуаз в вязкости, 3 x 10⁻¹⁶ sec⁻¹ в скорости деформации. и 8 баров в стрессе. Неровности поднятий и неотектонизм часто устанавливаются и часто обнаруживают старое геодинамическое наследие (например, предбайкальский / готический пласт коренных пород с высокой геодинамической активностью). Пиковые значения ледниковой изостазии связаны с интенсивной трещиноватостью, разломами и сейсмической активностью.

Информация журнала

GeoJournal — международный журнал, посвященный всем отраслям пространственно интегрированных социальных и гуманитарных наук. Этот многолетний журнал стремится публиковать передовые, инновационные, оригинальные и своевременные исследования со всего мира и по всему спектру социальных и гуманитарных наук, которые имеют явный географический / пространственный компонент, в частности, в шести основных областях GeoJournal: — Экономика и география развития — Социально-политическая география — Культурно-историческая география — Здоровье и медицинская география — Экологическая география и устойчивое развитие — Юридическая / этическая география и политика

Информация об издателе

Springer — одна из ведущих международных научных издательских компаний, издающая более 1200 журналов и более 3000 новых книг ежегодно, охватывающих широкий круг предметов, включая биомедицину и науки о жизни, клиническую медицину, физика, инженерия, математика, компьютерные науки и экономика.

Подробная ошибка IIS 8.5 — 404.0

Ошибка HTTP 404.0 — не найдено

Ресурс, который вы ищете, был удален, изменено название или временно недоступен.

Наиболее вероятные причины:

Указанный каталог или файл не существует на веб-сервере.
URL-адрес содержит опечатку.
Пользовательский фильтр или модуль, например URLScan, ограничивает доступ к файлу.

Что можно попробовать:

Создайте контент на веб-сервере.
Просмотрите URL-адрес браузера.
Создайте правило трассировки для отслеживания неудачных запросов для этого кода состояния HTTP и посмотрите, какой модуль вызывает SetStatus. Для получения дополнительной информации о создании правила трассировки для неудавшихся запросов щелкните здесь.

Подробная информация об ошибке:

Модуль	Веб-ядро IIS
Уведомление	MapRequestHandler
Обработчик	StaticFile
Код ошибки

7800

Запрошенный URL	https: // wafwa.neoreef.com:443/Documents and Settings / 37 / Site Settings / documents and settings / 37 / site documents / working groups / elk workshops / 1984 г. Эдмонтон, Альберта, лоси, 1984 г., Эдмонтон, Альберта, лоси, 1984 г. .pdf
Физический путь	D: \ inetpub \ Nodes \ Node 05 \ wwwroot \ Documents and Settings \ 37 \ Site Settings \ documents and settings \ 37 \ site documents \ working groups \ elk workshops \ 1984 edmonton alberta elk мастерская \ 1984 мастерская лосей Эдмонтона Альберты \ 1984 — мастерская лосей западных штатов и провинций.pdf
Метод входа в систему	Анонимный
Вход в систему Пользователь	Анонимный

Дополнительная информация:

Эта ошибка означает, что файл или каталог не существует на сервере. Создайте файл или каталог и повторите запрос.

Просмотр дополнительной информации »

конструкция с наличником, монтаж и установка системы, преимущества и недостатки продукции, отзывы

Особенности

Исполнение

Положительные и отрицательные стороны

Фурнитура и дизайн

Как выбрать откосы QUNELL в 2020 году? Какие откосы лучше? Всё что нужно знать об откосах Qunell — виды, преимущества, недостатки: фото+видео+отзывы+вопрос/ответ

Елена Борисовна

Евдокия Петровна

эксперт Роман Евглевский

видео-отчет До и ПОСЛЕ

Купить откосы Qunell в Одессе и области недорого

Оригинальная откосная система Qunell в Одессе — лучший выбор

Наличник откоса

Панель откоса

Стартовый профиль откоса

Крышка угловая откоса

Защёлка откоса

Почему выгодно купить откосы Кюнель в Одессе в компании Okna City

Как выбрать откосную систему QUNELL в 2020 году?

Какие откосы лучше?

Откосы кюнель

Откосы Qunell (Кюнель) для окон

Восстановление откосов из ПВХ панелей Qunell (Кюнель) для оконных и дверных проёмов.

Что представляет собой откосная система Qünell

Что представляют собой откосные системы Qünell

Они состоят из нескольких соединяемых друг с другом в один клик элементов:

Преимущества откосных систем Qünell

Цветовые и декоративные решения систем Qünell

Откосные системы «Qunell» — «STARPROM INOVATION»

В поиске простых и правильных решений для отделки откосов

Откосная система Qünell: щелк – и готово

Дерево: красиво и экологично, но подходит не всем

Штукатурные откосы: дешево и сердито

Гипсокартон: теплее, но сложнее

Пластиковые сэндвич-панели: шаг к прогрессу

Пластиковые откосы: собери окно сам

Основные роли ДНК-полимераз, эпсилон и дельта в вилке репликации эукариот, эволюционно консервативны

Abstract

Сведения об авторе

Введение

Результаты

Подход

Направление репликации ДНК в локусе

Характеристика мутанта

Мутационное смещение в штаммах

Характеристика мутанта

Включение rNMP в ДНК с помощью Polε M630F

Обсуждение

Синтез отстающих цепей с помощью Polδ

Синтез ведущих цепей, Polε

Включение и восстановление rNMPs в ДНК

Репликация ДНК в

Материалы и методы

Создание мутантных штаммов ДНК-полимеразы

Определение скорости спонтанной мутации

Двухмерный гель-анализ

Обнаружение чувствительных к щелочам участков в геномной ДНК

Саузерн-блоттинг

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Рисунок S2.

Таблица S2.

Благодарности

Вклад авторов

Ссылки

Климат | Бесплатный полнотекстовый | 133-летний отчет об изменении и изменчивости климата из Шеффилда, Англия,

3.1. Среднее значение

3.2. Крайние значения

3.3. Анализ климатической модели

Добро пожаловать в национальный гольф-клуб Джека Фроста

Отправьте новый купон, чтобы помочь другим получить скидки!

Путеводитель по горнолыжным курортам Пенсильвании — очень полный

Купоны и промокоды Jack Frost & Big Boulder Poconos Resorts 12222

Фреймворк для использования искусственных нейронных сетей для очистки воды: разработка и применение | Водоснабжение

Устройства прямого сердечного сжатия — Скачать PDF бесплатно

Фенноскандинавское поднятие и геодинамика позднего кайнозоя: геологические данные по JSTOR

Подробная ошибка IIS 8.5 — 404.0

Ошибка HTTP 404.0 — не найдено

Ресурс, который вы ищете, был удален, изменено название или временно недоступен.

Наиболее вероятные причины: