Tero gs 4: Мотокультиватор TERO GS-4 купить дешево в нашем интернет-магазине

Содержание

мотоблок tero gs 12 с косилкой отзывы

На чтение 7 мин Опубликовано Обновлено

Отзыв №1

Занимаюсь профессионально постройкой дома. Такой мотоблок tero gs 12 с косилкой мне нужен в работе. Раньше была дорогая бош. Поработала чуть более месяца и сдохла — Встал вопрос о покупке новой. Искал в сети, в различных интернет-магазинах. Перебрал очень много вариантов. Сразу скажу, что мотоблок tero gs 12 с косилкой типа известных марок из-за своей дороговизны -мной не искались. Ещё усложняло выбор. Попалась на глаза мотоблок tero gs 12 с косилкой, начал анализировать, читать отзывы, Самую низкую цену предложил все инструменты ру Заказал, через 3-дня пришла. Ну и вот, собственно работает у меня уже 3 год. Ну а в общем претензий нет.

Отзыв №2

У хорошего хозяина в доме имеется, как правило, не один мотоблок tero gs 12 с косилкой. Последние имеют свойства регулярно теряться или выходить из строя при интенсивной работе. Скажу честно, при строительстве теплицы израсходовал сразу мотоблок tero gs 12 с косилкой. Соответственно и при поиске мотоблок tero gs 12 с косилкой обычно несколько требований. — желательно, чтобы она была крепкой и подходила для всех видов работ; Всем требованиям отвечает недавно купленная в магазине яд маркет мотоблок tero gs 12 с косилкой. Надеюсь, что мотоблок tero gs 12 с косилкой проработает еще много лет.

Отзыв №3

Давным-давно хотел приобрести мотоблок tero gs 12 с косилкой. Не скрою, искал мотоблок tero gs 12 с косилкой я долго и внимательно. Исходя из собственных пожеланий и удобства удержания в руках, я остановился на мотоблок tero gs 12 с косилкой. Я сохранил в закладках несколько вариантов и стал их потихоньку искать варианты по стоимости и вариантам доставки. В итоге выбрал на описываемом инструменте из магазина косторама. Связался оказалось, что присмотренного устройства не было в наличии, но они мне нахвалили аналог, особо не отличимый по цене и характеристикам. Я согласился мотоблок tero gs 12 с косилкой. С большими советами воздержусь, но думаю, что для мелких поделок устройство сойдет.

Отзыв №4

Долго мечтал о покупке хорошего мотоблок tero gs 12 с косилкой. Перед покупкой консультировался со специалистом, С магазином где брал знаком, всегда там покупаю поэтому на других магазинов не засматривался. Приобрел мотоблок tero gs 12 с косилкой, прислали почтой России, доставка по срокам меня порадовала, мотоблок tero gs 12 с косилкой удобный советую.

Отзыв №5

Хороший выбор этот мотоблок tero gs 12 с косилкой. Как он мне помогает, когда надо что-то подремонтировать дома или на даче. мотоблок tero gs 12 с косилкой куплен года четыре назад. В целом, удобный мотоблок tero gs 12 с косилкой, рекомендую. В руке держиться очень удобно, не скользит. Очень меня выручает.

Отзыв №6

В ремонте не разбираюсь. Ручная работа явно не мои сильные стороны, т. К. В большинстве случаев использую наемному труду. Но стройка встала уже в такую деньги, что некоторые мелочи, с которыми я могу сделать без посторонней помощи, пришлось выполнять лично. Вот именно для таких целей я и задался покупкой мотоблок tero gs 12 с косилкой. Профессиональные модели мотоблок tero gs 12 с косилкой, сразу отклонил. Излишне и мне явно такое не нужно, а вот моим цели мотоблок tero gs 12 с косилкой вполне можно и купить. По этому выбрал себе мотоблок tero gs 12 с косилкой. В результате работ все требования я успешно произвел. Во время работы заминок по работе я не заметил. Все работает на хорошем уровне и сбоев не наблюдалось. Покупкой доволен, могу рекомендовать!

Отзыв №7

Этот мотоблок tero gs 12 с косилкой является одним из самых выгодных в плане цены! Для меня, главное цена и качество. Так как мне часто нада производить работы в весьма ограниченном пространстве, большие габариты очень часто мешают. Для такой цены отличный вариант!

Отзыв №8

Заказывал мотоблок tero gs 12 с косилкой в магазине спецдиспетчер. Ру, долго подбирал модель из расчета своего скупого бюджета. В Магазине уверяли, что будет качественный мотоблок tero gs 12 с косилкой. После получении товара, в целом мотоблок tero gs 12 с косилкой свои функции выполняет, хотя качество никакое, но и цена небольшая. Поэтому по пятибалльной шкале день добрый, хотел бы рассказать о своей новой покупке, мотоблок tero gs 12 с косилкой. Сам мотоблок tero gs 12 с косилкой компактный, удобно брать с собой, не занимает много места. Из-за относительно небольшого размера, удобно работать в небольших местах. Использую уже его тройку месяцев, из-за моей работы, с ним практически каждый день, качеством доволен, всем советую.

Отзыв №9

Два года назад закупил мотоблок tero gs 12 с косилкой. И только сейчас решил написать отзыв. Я купил, когда мотоблок tero gs 12 с косилкой стоил намного дешевле. За эти деньги, купить в магазинах было очень трудно. Надежная, компактная. Мое мнение! Я не пожалел, что купил мотоблок tero gs 12 с косилкой. С малым бюджетом — далеко не убежишь, а в хозяйстве — нужная вещь.

Отзыв №10

Давным-давно хотел заиметь мотоблок tero gs 12 с косилкой. Не скрою, искал мотоблок tero gs 12 с косилкой я долго и внимательно. Исходя из собственных пожеланий и удобства удержания в руках, я остановился на мотоблок tero gs 12 с косилкой. Я сохранил в закладках несколько вариантов и стал их потихоньку искать варианты по стоимости и вариантам доставки. В итоге выбрал на описываемом инструменте из магазина масштаб. Позвонил оказалось, что данного устройства не было в наличии, но они мне предложили аналог, особо не отличимый по цене и характеристикам. Я согласился мотоблок tero gs 12 с косилкой. С большими советами воздержусь, но думаю, что для строительных работ устройство сойдет.

Перед свершениями любой покупки, к примеру — мотоблок tero gs 12 с косилкой, необходимо разузнать необходимую информацию. Это касается не только, непосредственно, информации о строении продукта, а то и какой он в действии. В такие моменты, на помощь приходят отзывы.

Отзывы помогают принять решения в пользу того, или иного товара, и является важным критерием для покупателя. Они написаны разными людьми, некоторые из них -специалисты, которые помогут изучить и выбрать инструмент. Обмен полезной информацией, помогает узнать действительно много новой и увлекательной информации. Независимые отзывы о мотоблок tero gs 12 с косилкой только на нашем портале.

Характеристики

В текущем разделе вы можете ознакомиться с рассказами о мотоблок tero gs 12 с косилкой. Опираться на отзывы необходимо перед непосредственной покупкой какого-либо продукта, ведь на рынке присутствует большое количество товаров и порой не всегда можно определить тот, который подойдёт под ваши потребности. Если вы желали найти самые честные и правдивые обзоры на мотоблок tero gs 12 с косилкой, мы предоставляем вам нашу подборку данных со всего интернета.

Вы без труда найдёте необходимую модель и узнаете цену и др. Информацию.

Ни один из нас не хочет оказаться обманутым купленным продуктом. Чтобы избежать таких ситуаций, следует пользоваться услугами проверенных компаний. Отзывы о продуктах и товарах Вам в без сомнений помогут сделать правильный подбор. В том случае, если Вам есть что рассказать другим посетителям о каком-нибудь товаре, либо о компании-производителе в целом, оставьте свой отзывы в комментариях у нас.

Вся выше перечисленная информация дарит возможность человек самому понять, как использовать знания при выборе продукта. К примеру — та же мотоблок tero gs 12 с косилкой. Отзывы — это и есть обратная связь, которой не только можно, но и нужно пользоваться. Благодаря им, производитель улучшает качество продукта и расширяет его возможности, что ставит этот самый продукт на ступеньку выше других.

Какое масло заливать в мотоблок или культиватор, как правильно произвести замену

Во время работы мотоблока большой нагрузке подвергается двигатель и, чтобы защитить его от преждевременного износа, применяют моторное масло. Средство бывает разным по химическому составу и свойствам, поэтому его используют согласно классификации.

Какое масло заливать в мотоблок

Как правило, в инструкции к мототехнике производитель указывает, какую марку машинного масла и в каком объёме лучше использовать. Если же таких рекомендаций нет, средство выбирают по следующим характеристикам:

Параметр SAE свидетельствует о классе вязкости вещества и состоит из буквенно-цифровой аббревиатуры, где буква «W» указывает на возможность применения при низких температурах. Стоящее перед ней число обозначает вязкость при отрицательных значениях термометра, а цифры после «тире» — при плюсовых. Эти показатели характеризуют, насколько легко будет жидкость прокачиваться по системе, и как быстро она достигнет поверхностей трущихся деталей, не допустив их сухого трения.

Параметр API разделяет смазочный материал по эксплуатационным свойствам на категории C и S. К категории C относят средства, предназначенные для четырёхтактных дизелей, у которых воздушное охлаждение, к категории S — для бензиновых моторов. Поэтому при выборе жидкости обязательно следует обращать внимание на эту маркировку, так как для дизельного и карбюраторного двигателя она имеет различный состав.

Параметр ACEA классифицирует масло по показателю HT (вязкость в условиях повышенных температур)/HS (скорости сдвига), который показывает, насколько смазка является энергосберегающей. Чем выше данная величина, тем она лучше предохраняет узлы двигателя от износа. Заливать вещество с высоким показателем мПа

*с рекомендуется в трактор, мини-трактор, а так же тяжёлые мотоблоки Нева, предназначенные для больших нагрузок.

Ниже приведены виды машинной смазки, которые по своим характеристикам являются самыми оптимальными для культиватора или мотоблока. Разумеется, применять их можно, если нет специальных рекомендаций от производителя оборудования, и в соответствии с маркировками S и C. Итак, это масла:

  • 5w30, 5w40 — всесезонные, которые можно заливать в мототехнику при температуре окружающей среды не ниже -25оС;
  • 10w30, 10w40 — обладающие антикоррозийными свойствами;
  • 15w40, 20w40 — предназначенные для заливки в двигатель при температуре +45оС и выше;
  • 0w30, 0w40 — созданные для зимнего применения;
  • MIL-L — разработанные для военных машин и могут применяться на мотоблоках с моторами дизельного (с шифром 2104) и карбюраторного (с шифром 46152) типа.

Смазку с двойной маркировкой (SG/CD, SF/CC) можно заливать в любые моторы: она является универсальной и одинаково подходит, как для дизеля, так и моторов, функционирующих на бензине (как, к примеру, мотокультиватор Texas). Среди разнообразия смазочной продукции наибольшей популярностью пользуется средство, выпускаемое под брендами Mobil, Castrol, ZIC, Shell Helix. Для улучшения действия и повышения качества в него добавляют присадки — Oil Additiv, BIZOL, Cera Tec и прочие. Применять их можно при температуре окружающей среды от -25ОС до +25ОС.

Также при выборе смазки необходимо брать в расчет сезонность и погодные условия, при которых планируется задействовать садовую технику. Хотя мотоблоки Зубр, Фермер, Салют, Нева, Фаворит, Кентавр, Чемпион и прочие модели разработаны для функционирования в летнюю пору — никто не запрещает извлекать из них пользу зимой. Так, при зимней эксплуатации оборудования в качестве снегоуборщика или перевозчика дров, рекомендуют заливать в мотор смазочную жидкость, специально созданную для низких температур.

Как произвести замену масла

Чтобы мототехника функционировала бесперебойно и служила длительный срок, необходимо периодически производить замену смазки в редукторе и двигателе. Первый раз это делают после обкатки, а затем по истечении каждых 50-100 часов эксплуатации мототехники (при интенсивных нагрузках «заливаться» потребуется ещё чаще), если иное не обозначено производителем.

Замена масла в редукторе

Для смазки редуктора применяют любое трансмиссионное масло, например, ТАД-17, ТАП-15В или с иной маркировкой по ГОСТу 23652-79. Перед тем как его залить, проверяют наличие старой жидкости. При необходимости ее нужно поменять, предварительно проверив объем бака. Проверка в таких моделях мотоблока, как Нева, проводится следующим образом:

  • Оборудование размещают на горизонтальной поверхности так, чтобы был доступ до редуктора, а само оно оказалось в наклонном положении (так будет удобнее лить средство).
  • Вставляют в отверстие на редукторе щуп (это может быть металлический прут длиною 65-70 см, согнутый в дугу) и замеряют им уровень наличия вещества.

Если погружённый в редуктор щуп окажется на 30 см в жидкости, значит нет необходимости её дополнительно заливать. При других результатах смазочный материал следует залить в редуктор до нужного уровня. В абсолютно сухой редуктор потребуется лить не менее 2 литров смазочной жидкости.

Замена масла в двигателе

Процедура замещения смазочной жидкости в моторе производится так:

  • Двигатель мототехники запускают и прогревают.
  • Мотоблок устанавливают на возвышенную горизонтальную поверхность.
  • Открывают сливное отверстие бака, чтобы слить содержимое в отдельную ёмкость, а затем плотно закрывают.
  • Заливают через наливное отверстие новое средство, контролируя его уровень щупом.
  • Сухой ветошью протирают отверстия для слива и налива, тщательно удаляя остатки смазочного вещества.

Стоит моторное масло не дёшево, но экономить на нём, как и на топливе, не следует. Заливать смазку нужно только оригинальную и высокого качества, так как от неё будет зависеть работоспособность мотоблока, а также долговечность его механизмов. Только качественное средство и с правильно подобранными параметрами сможет оказать максимально полезное действие и обеспечить минимальный износ внутренних деталей двигателя. Инструкция подходит для таких мотоблоков, как Shtenli (Штенли), Патриот, Тарпан, Каскад, Хопер, Агат, Ока, Луч, МТЗ.

Инструкция по эксплуатации 4-х тактного двигателя с воздушным охлаждением

Что нужно знать об обкатке и эксплуатации четырехтактных бензиновых двигателей с воздушным охлаждением установленных на садовой, строительной и дорожной мото-технике.

Бензиновые четырехтактные двигатели воздушного охлаждения широко применяются на садово-парковой технике — мотоблоки, мотокультиваторы, газонокосилки, снегоуборщики, мотопомпы, мини-тракторы, на строительной и дорожно-строительной технике — бензогенераторы, виброплиты, вибротрамбовки.

Перед началом эксплуатации двигателя нужно ИЗУЧИТЬ ИНСТРУКЦИЮ ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ. Многие покупатели, к сожалению, этого не делают. Поэтому возникают самые элементарные вопросы по использованию мотора.

СОВЕТ: ЧИТАЙТЕ РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ДВИГАТЕЛЯ!!!

Во-первых: какой бензин необходимо использовать.

Мы советуем использовать чистый, свежий, неэтилированный бензин с октановым числом АИ92. Двигатели с воздушным охлаждением не предназначены для работы с топливом АИ95 и АИ98. В 95-м и 98-м бензине содержатся присадки, которые губительно действуют на поршневую систему двигателя, приводя его к перегреву и поломке.

Не смешивайте масло с бензином. Это может привести к неисправности двигателя, которая не покрывается гарантией.

ИСПОЛЬЗУЙТЕ СВЕЖИЙ БЕНЗИН АИ-92 СО СРОКОМ ХРАНЕНИЯ НЕ БОЛЕЕ 30 СУТОК!!!

Во-вторых: какое масло заливать в картер двигателя.

Многие считают автомобильное масло известных брендов лучшим для использования в двигателях для мотоблока (мотокультиватора, снегохода, электрогенератора, мотопомпы и т.д.). Это совершенно не так. Автомобильные масла предназначены для работы в двигателях с водяным охлаждением, а не с воздушным. Температура кипения автомобильных масел ниже чем у масел в которых содержатся специальные присадки для двигателей с воздушным охлаждением.

Используйте масло с классом качества SF, SG, SH, SJ, CD или выше. Не применяйте присадки к маслу. Выбирайте вязкость масла исходя из температуры окружающей среды.

SAE 30 (5°C и выше) рекомендуется для температур выше 5°С. При использовании ниже 5°С может быть причиной трудного запуска.

10W-30 (-18 до 38°C) рекомендуется для переменных температур. Данное масло обеспечивает холодный запуск двигателя, но может привести к повышенному расходу масла при температуре выше 27°C.

*Проверяйте уровень масла более часто при повышенной температуре воздуха.

Synthetic 5W-30 (-30 до 40°C). Синтетическое масло, обеспечивает работу двигателя во всём диапазоне температур, а также легкий запуск и пониженный расход масла.

5W-30 (5°C и ниже) рекомендуется для работы в зимних условиях.

ЗАЛИВАЙТЕ МАСЛА ТОЛЬКО УКАЗАННЫЕ В ИНСТРУКЦИИ НА ДВИГАТЕЛЬ!!!

Всегда следите за уровнем масла. Уровень должен быть по последнюю резьбу заливной горловины в горизонтальном положении двигателя (как показано на рисунке). Заливные и сливные отверстий находятся на передней и задней части двигателя.

Уровень заливки масла в двигатель

На газонокосилках обращайте внимание на мерный щуп. На щупе двигателя с вертикальным валом указаны метки.

В разных двигателях разный объем картера. Если у Вас двигатель 4, 5,5, 6,5 или 7 л.с. — то заливать нужно 600 мл. масла. В двигатели 7,5 л.с. заливается 900 мл. В моторы мощностью 8, 9, 11, 13 и 15 л.с. соответственно 1,1 л.

В-третьих: запуск двигателя.

При первом или холодном запуске двигателя происходит повышенная нагрузка на поршневую систему. Высокие обороты могут навредить мотору. Поэтому, запускать мотор необходимо на 1/3 положения газа. А обкатывать нужно на средних оборотах.

В-четвертых: как происходит обкатка двигателя.

Двигатели с воздушным охлаждением «не любят» холостого хода. Запустите двигатель, прогрейте в течении 1-2 мин. и обкатывайте в работе. Во время обкатки старайтесь придерживаться 50-75% нагрузки и делайте обязательные перерывы в работе через 20-25 мин. После перерыва, когда двигатель остыл (15-20 мин.), можно опять продолжить работу. В таком режиме двигатель должен поработать первые 4-5 часов, после чего нужно обязательно заменить масло. Обкатка закончена.

Основные причины поломок двигателей

ПОМНИТЕ!!! Поломки двигателя происходят, в основном, от неправильной эксплуатации.

Первая причина поломки: не закрытый топливный кран.

Когда двигатель не работает, а топливный кран открыт, происходить переливания карбюратора и «заливание» свечи. Также бензин попадает в картер двигателя. А это приведет к избыточному давлению во время работы двигателя и выдавливанию сальников. Потом эта смесь бензина и масла попадет в камеру сгорания и через выпускной клапан в глушитель. Постепенно глушитель засорится остатками масла и двигатель потеряет тягу.

ЗАКРЫВАЙТЕ ТОПЛИВНЫЙ КРАН ПОСЛЕ РАБОТЫ ОБЯЗАТЕЛЬНО!!!

Вторая причина поломки: при перевозке или хранении перевернули двигатель.

Так как двигатель 4-х тактный — бензин заливается в бак, масло в картер — и смешиваться они не должны. После переворота эти компоненты смешиваются как правило в карбюраторе. После этого двигатель нужно будет разбирать и чистить.

НЕ ПЕРЕВОРАЧИВАЙТЕ ЗАПРАВЛЕННЫЙ ДВИГАТЕЛЬ!!!

И третья причина поломки: неправильный запуск мотора ручным стартером.

Многие пользователи четырехтактных двигателей думают, что чем сильнее дернуть ручку стартера, тем лучше двигатель заведется. Это не так. Рукоятку стартера нужно натянуть до зацепления кулачков и после этого плавно, но с большой амплитудой потянуть вверх. И двигатель (если он исправен конечно) обязательно запустится.

НАУЧИТЕСЬ ПРАВИЛЬНО ЗАВОДИТЬ ДВИГАТЕЛЬ!!!

Таблица обслуживание двигателей

Удачного Вам пользования.

Звоните +7(963)723-00-43. Будем рады ответить на вопросы, связанные с эксплуатацией двигателей с воздушным охлаждением Honda, Briggs&Stratton, Mitsubishi, Subaru-Robin, Lifan, Carver, Loncin, Champion.

Возникновение поведения в самоорганизующейся сети живой материи

Основные версии:

Без более подробного представления значения различных результатов, показанных для спектра собственных значений и структуры модели, очень трудно оценить степень, в которой наблюдаемые изменения на самом деле коррелируют с важными поведенческими реакциями. Частично это происходит из-за расплывчатых и неподтвержденных утверждений, таких как (строка 161) «Это наблюдение, наконец, подчеркивает, что непрерывный спектр режимов и его изменчивость в активации являются неотъемлемой частью поведения организма» и (строка 215) «Наши результаты предполагают, что непрерывный спектр режимов сокращения позволяет сети живого вещества P.polycephalum, чтобы быстро переключаться между множеством моделей поведения, используя суперпозицию нескольких паттернов сокращения».

Мы благодарим рецензентов за указание на необходимость более подробного представления результатов.

Теперь мы значительно изменили рукопись, чтобы лучше показать, как изменения в динамике сокращения коррелируют с поведенческими реакциями, в частности, с наиболее устойчивой поведенческой реакцией в Physarum : создание фронтов передвижения при встрече с пищей.Мы изменили выделенные предложения и предоставили прямые ссылки на рисунки, изображающие описанные результаты.

Конкретные вопросы, которые необходимо решить в этом отношении, включают:

– Отсутствует обсуждение спектра собственных значений. Хотя верно то, что авторы не нашли низкоразмерную систему (хотя я не уверен, почему они этого ожидали), они нашли степенной спектр. Существует обширная литература о графах, обладающих этим свойством (в том числе многие из биологии и экологии), и авторам следует обратиться к этой работе.Верно также и то, что чисто случайные сети также имеют непрерывный спектр собственных значений, хотя это не степенной закон, иногда он может выглядеть так. Насколько хорошо авторы могут количественно определить, что наблюдаемые данные являются степенным законом, а не более репрезентативным для случайного процесса. Существует ли какой-то конкретный контрольный набор данных, который можно создать путем рандомизации исходных данных, чтобы продемонстрировать биологический смысл обнаруженных признаков?

Мы благодарим рецензентов за указание на необходимость дополнительного теоретического обсуждения спектра собственных значений в дополнение к уже существующему экспериментальному анализу влияния топологии сети на спектр.

Во-первых, мы хотели бы отметить, что, хотя мы согласны с тем, что наблюдаемый спектр собственных значений предполагает степенной закон, мы воздерживаемся от утверждения этого в статье. Как уже упоминалось рецензентами, спектр собственных значений, подобный степенному закону, может иметь множество источников и, как известно, его трудно очертить, см., например, М. Штумпф и М. Портер, (2012) «Важнейшие истины о степенных законах», Science, Vol. 335, выпуск 6069, стр. 665-666. Самое важное для нас наблюдение состоит в том, что спектр непрерывен и не имеет очевидного значения отсечки.Чтобы дополнительно подтвердить, что наблюдаемая структура спектра собственных значений является результатом динамики сжатия, характерной для сети, мы проводим два дополнительных анализа:

Мы создали контрольный набор данных, рандомизировав исходные данные по временной оси. В частности, мы независимо рандомизируем данные в каждом столбце (для каждой пространственной точки) матрицы данных, а затем выполняем PCA для этих рандомизированных данных. Спектр рандомизированных данных, см. рисунок 1 — дополнение к рисунку 1, не показывает следов степенного закона.Сравнение исходных и контрольных данных показывает, что исходный спектр собственных значений действительно отражает динамику сокращения, которая лежит в основе процессов биологического значения: ощущения питательных веществ, питания и передвижения. Теперь мы изображаем режим распределения рандомизированных данных в рукописи как рисунок 1B.

Чтобы дополнительно исключить топологию сети как источник непрерывного спектра собственных значений, мы сгенерировали смоделированные данные бегущей волны и наложили их на сеть. Анализ PCA показывает только две моды, коэффициенты которых сдвинуты по фазе на 90 градусов для наложения на бегущую волну, см. Ответ автора, изображение 1.Таким образом, сложность пространственной сети не является причиной непрерывного спектра собственных значений.

PCA смоделированных данных бегущей волны, наложенных на сеть из эксперимента.

Перистальтическая волна проходит горизонтально справа налево по сети. Паттерн полностью реконструируется с помощью двух режимов PCA. (A) Временная динамика модовых коэффициентов, заданная двумя синусоидами, сдвинутыми на девяносто градусов друг относительно друга.(B) Пространственная структура двух режимов. Пространственные структуры также смещены на четверть длины волны друг относительно друга.

– Трудно судить, объясняют ли выводы из трубки результаты для сетей. Это связано с тем, что для разных случаев показаны разные аспекты PCA. Некоторые проблемы заключаются в следующем: (i) наблюдается ли нарушение симметрии в трубке, также присутствующее в сети, и как мы можем это увидеть (например, в форме мод) и (ii) изменяется ли количество значимых мод в неработающей трубке в аналогичным образом перед подачей сигнала изменяются таким же образом, как и в сети.

Мы благодарим рецензентов за указание на то, что мы не полностью продемонстрировали аналогию между динамикой внутри сети и одиночной трубки.

В пункте (i) рецензенты ссылаются на феномен «нарушения симметрии» при создании фронтов движения. Хотя мы согласны с тем, что использование этого термина заманчиво, мы предпочитаем характеризовать наблюдаемое явление как изменение направления движения на противоположное. Аналогия между одной трубкой и сетью не зависит от семантики.А именно, до стимула сеть показывает формирование (рост) локомоционного фронта в левом нижнем углу. После применения стимула на противоположном краю сети направление локомоции меняется на противоположное. Мы обнаружили, что изменение направления движения коррелирует с активацией определенных паттернов сокращения, см. Рисунок 3 (постстимул) и Рисунок 3 — приложение 2 к рисунку (до стимула). Режимы 2 и 3 на рисунке 3B являются драйверами постстимула генерации фронта передвижения.Мы также отмечаем активацию режима 1 примерно через 20 минут после применения стимула (см. рис. 3 D). Примечательно, что мода 1 имеет почти идентичную пространственную структуру предварительному стимулу моды 1, показанному на рисунке 3 — дополнение к рисунку 2B. Повторная активация этого режима указывает на то, что этот паттерн сокращения присущ сети и не просто стирается стимулом.

Динамика сокращения, связанная с реверсированием фронта локомоции, аналогична в трубке и сети: после стимула исходный паттерн сокращения преобладает над новым режимом, но с возможностью обратного переключения на исходный паттерн.Одномерная природа одиночной трубки дополнительно позволяет нам развивать механистическое понимание передвижения с точки зрения паттернов сокращения стоячей и бегущей волны.

В пункте (ii) обозреватели спрашивают, есть ли сходство между динамикой количества значимых мод в одиночной трубке и в предварительном стимуле сети. На изображении ответа автора 2 мы показываем соответствующую кривую обеих систем за равные промежутки времени до стимула. В течение этих интервалов и одиночная трубка, и сеть испытывают медленный направленный рост.В обоих случаях количество значимых мод значительно меняется во времени.

Динамика количества значимых мод в сети (А) и одиночной трубке (В) до применения стимула.

Пунктирная линия — среднее значение кривой. Общим для обеих систем является большая изменчивость числа значимых мод.

Чтобы продемонстрировать аналогию в динамике сокращения между сетью и одиночной трубкой, мы теперь включаем новый рисунок 3 с рисунком 3-дополнение 2, соответственно, в исправленную рукопись, и мы объясняем эти результаты в разделе «Поведение реакции на стимул сочетается с активацией обычных, крупномасштабные паттерны сжатия, перемежающиеся многомодовыми состояниями».

– Авторы должны тщательно выявить связь между качественным изменением динамики и поведением (т.е. реакция на внешний раздражитель) более четко обосновать название своего исследования. Авторы, кажется, показали, что поведение реализуется изменением динамики сокращения (одна форма самоорганизации) в относительно постоянной топологии случайной сети (другая форма самоорганизации). Учитывая, что самоорганизация в топологии Physarum подробно изучалась в предыдущих работах (например, Nakagaki et al. в Science…), новизной здесь является утверждение о том, что динамика соответствует различным «поведениям», таким как движение к или от от раздражителя или усиленной накачки оптической жидкости.

Рецензенты правы: мы используем разложение трубочных сокращений, чтобы показать, что поведение является результатом богатого репертуара состояний сокращения. Впервые внимание отвлекается от топологических изменений в сети и вместо этого сосредотачивается на процессах, которые их вызывают. На рисунках R3 и R4 мы сопоставляем динамику сокращения и измеренное поведение роста, обнаруживая различные модели сокращения для разных состояний фронта движения до и после применения стимула.Примечательно, что наш анализ сетевых сокращений показывает различное поведение в пределах почти постоянной топологии сети. Определенное поведение связано с небольшим количеством доминирующих режимов (см. различные фронты роста в сети), в то время как переходы между видами поведения отмечены одновременной активацией многих режимов. Наш теоретический анализ с использованием спектра рандомизированных данных на рисунке 1 (дополнение к рисунку 1) также показывает, что ключом к поведению является не сложность сети, а динамика сокращения.

Мы благодарим рецензентов за признание и обобщение идеи статьи, которую мы теперь сделали более ясной, включив количественную презентацию, демонстрирующую соответствие между динамикой сокращения и поведением сети, показанной на обновленном рисунке 3 с приложением 2 к рисунку 3.

Каталожные номера:

1. Штумпф, М. и Портер, М., (2012) Критические истины о степенных законах. Наука, Том. 335, выпуск 6069, стр. 665-666.

2. Берман Г.Дж., Чой Д.М., Биалек В., Шаевиц Дж.В. (2014) Картирование стереотипного поведения свободно перемещающихся плодовых мушек. Интерфейс JR Soc 11(99). Дои: 10.1098/rsif.2014.0672.

3. Жюльен Ж.-Д. и Алим, К. (2018) Колебательный поток жидкости влияет на масштабирование волны сжатия в зависимости от размера системы. ПНАС 16 октября 2018 г. 115 (42) 10612-10617.

[Примечание редактора: перед принятием были предложены дальнейшие изменения, как описано ниже.]

Рецензент №1:

В целом, рукопись улучшилась после пересмотра, и я ценю усилия авторов.Однако есть еще грубые исправления, и я перечисляю некоторые конкретные комментарии ниже.

Я все еще нуждаюсь в большем понимании непрерывного спектра. Может быть, контроль просто пространственно локален? Насколько зависит обнаружение многомерности от конкретного представления поведения локальных сокращений0? Или по методу (ППС)?

Мы благодарим рецензента за его вдумчивый отзыв. В нашем подробном ответе ниже мы сначала представляем дополнительные данные о динамике непрерывного спектра, прежде чем обсуждать идею локализованного управления и то, что управляет многомерностью спектра, прежде чем мы, наконец, обосновываем наш выбор метода.

Чтобы учесть непрерывный характер спектра, важно отметить, что динамика сокращения P. polycephalum не является резким переключением между несколькими дискретными крупномасштабными состояниями сокращения. Чтобы наблюдаемая нами динамика сокращения плавно менялась, необходим непрерывный спектр, позволяющий активировать сокращения в плавном пространственном масштабе. На рисунке 3 (дополнение к рисунку 4) мы показываем мгновенный ранг 80 лучших режимов с течением времени для нестимулированной сети.Мгновенное ранжирование основано на относительных амплитудах (см. уравнение (2) в статье) и служит мерой активности режима. Мы наблюдаем, что моды часто меняют свой мгновенный ранг, перемещаясь в широком диапазоне рангов, что возможно только в непрерывном спектре.

Концепция локализованного управления , предложенная рецензентом, по-видимому, связана с вопросом, касающимся основного механизма, с помощью которого в сети организуются сокращения.Подчеркнем, что наблюдаемый нами спектр является непосредственным результатом наблюдаемой феноменологии сокращений, а не механизма, посредством которого сокращения координируются. Непрерывный спектр дальнодействующих паттернов, которые мы наблюдаем, может быть результатом ряда различных механизмов, например, потокового транспорта сигнальных молекул [2] или гидродинамической связи, но различение между ними выходит за рамки данной работы.

Чтобы рассмотреть многомерный характер динамики сокращений, мы начнем с предположения рецензента о том, что локальные сокращения являются причиной высокой размерности.Чтобы обсудить это, мы показываем на рисунке 1B модифицированную версию графика, который был включен в наш предыдущий ответ рецензентам. На этом рисунке мы сравниваем спектр собственных значений исходных данных со спектром рандомизированных данных. Как показано на рисунке 1B, спектр рандомизированных данных (серый) определяет верхнюю границу шума (красный), разделяя спектр на большие собственные значения и малые собственные значения, которые включают шум. Прежде чем обсуждать возможность локальных сокращений, полезно повторить интерпретацию больших собственных значений.Эти собственные значения соответствуют режимам сжатия с большим пространственным масштабом (см., например, рисунок 3C). Паттерны этих режимов отражают локомоционное поведение сети в ответ на стимул и целенаправленную активацию толстых трубок в сети (см. также [1] для обсуждения поведения в более длительных масштабах времени). Примечательно, что количество больших собственных значений существенно (~ 80). Таким образом, динамика сжатия является многомерной, даже если не учитывать часть спектра, лежащую ниже верхней границы шума.Теперь укажем на непрерывный спектр больших собственных значений в исправленной рукописи. Хотя можно построить модель чисто локальных сокращений, которая дает непрерывный спектр собственных значений, такая модель не приведет к режимам, демонстрирующим крупномасштабные паттерны, совместимые с морфологией и поведением сети, как мы их наблюдаем. Однако не исключен вклад локальных сжатий в наблюдаемый нами спектр. Например, возможно, что небольшие собственные значения (моды с низким рангом) на рисунке 1B связаны с локализованными сокращениями, например, с одной трубкой в ​​​​сети.Однако интерпретация таких локальных сокращений сильно зависит от конкретной морфологии сети и локального состояния. Мы еще раз подчеркиваем, что наличие локальных сокращений не изменит того факта, что мы последовательно наблюдаем долгосрочные паттерны по всей сети.

Наконец, мы обращаемся к роли выбора метода декомпозиции для нахождения высокой размерности. В одном измерении PCA эквивалентен разложению Фурье (по этому поводу см. также наш ответ на второй вопрос рецензента № 3 ниже).Таким образом, для одиночной трубки мы эффективно проводим разложение Фурье и находим непрерывный спектр (см. рис. 5 — дополнение к рисунку 1). В двух измерениях существуют другие методы декомпозиции, которые отличаются от PCA допущениями, сделанными для основы декомпозиции. Изменения базиса обычно не влияют на размерность, и на самом деле PCA часто используется в качестве шага предварительного анализа, который используется в другом методе декомпозиции для изменения базиса. Следовательно, среди стандартных методов двумерной декомпозиции вывод о высокой размерности выполняется качественно.Мы даем обсуждение выбора метода в исправленном Приложении 2.

Строка 16

Я рекомендую удалить «Удивительно», так как неясно, почему мы на самом деле ожидаем низкоразмерное ковариационное пространство. Я бы также удалил дополнительное слово «удивительно» в последнем абзаце введения.

Мы удалили оба употребления слова «удивительно». В аннотации (строка 16) мы заменили его словом «в частности», чтобы подчеркнуть, что это занимает центральное место в нашей работе.

Строка 26

Выбор Marom et al. (2002) в качестве ссылки является странным, поскольку это относится к нейронной активности в культивируемых сетях, то есть без тела и, следовательно, без поведения.

Мы благодарны рецензенту за указание на это. Мы согласны с тем, что этот выбор ссылки не является оптимальным, учитывая контекст исследования. В исправленной версии мы удалили эту ссылку и заменили ее ссылкой [Mochizuki et al., 2016], предоставляющей обзор активности нейронов у организмов, проявляющих поведение.

Строка 37

Я хотел бы добавить более свежие ссылки из работ по реснитчатым организмам, например. работы групп KY Wan и R Goldstein.

Мы благодарим рецензента за его предложение. Мы добавили [Wan and Goldstein, 2014] и [Wakefield et al., 2018] в качестве новых ссылок.

Строка 103 Откуда мы знаем, что phi_4 действительно возбуждает преимущественно более толстые трубки? Одиночное изображение может быть просто пространственной случайностью. Есть ли корреляция по всему набору данных?

Благодарим рецензента за вопрос.Визуальный осмотр кадров в светлом поле действительно показывает, что более толстые трубки являются доминирующей особенностью на больших временных интервалах набора данных. Кроме того, главные компоненты ранжируются в соответствии с их дисперсией (собственными значениями), которая определяется средним по времени квадратом амплитуды моды. Поэтому маловероятно, что режим, который активируется только в течение короткого промежутка времени, получит такой высокий рейтинг, как режим phi_4.

Строка 129 Следует лучше описать временную корреляцию мод.На первый взгляд это очень запутанно, так как моды из PCA, конечно, не коррелированы по всему набору данных. Таким образом, эти корреляции исходят из окна +- 15 кадров. Это следует пояснить в основном тексте и/или подписи к рисунку 2.

Мы благодарим рецензента за то, что он сообщил нам об этом потенциально запутанном моменте. Ответ заключается в том, что режимы PCA (например, режимы сети, показанные на рисунке 1C, или режимы ламп, показанные на рисунке 5C) пространственно некоррелированы, однако их активация во времени, безусловно, может быть коррелирована.Это то, что мы количественно оцениваем на рисунке 2, и мы выбираем окна +-15 кадров, чтобы увидеть, как эта корреляция меняется с течением времени. По предложению рецензента мы уточнили этот момент в тексте и подписи к рисунку 2.

Линия 151

Почему мы сразу переходим от описания рисунка 3А к рисунку 3Е, а затем возвращаемся к B-D?

Мы благодарим рецензента за указание на это и согласны с ним в том, что это неуклюжая презентация.Мы также заметили ту же проблему на рисунке 5. В исправленной рукописи мы изменили порядок подграфиков, скорректировали буквенные метки на рисунках 3 и 5, адаптировали подписи к рисункам и обеспечили правильные ссылки по всей статье.

Рецензент №3:

Несмотря на то, что переработанная рукопись улучшена по нескольким параметрам, я по-прежнему не убежден в том, что проведенный автором анализ на основе PCA выявил существенно новое понимание поведения P. Polycephalum. Мои основные критические замечания заключаются в следующем:

1.Как отмечают авторы в статье, существует много способов получить наблюдаемый непрерывный спектр мощности. Например, чистого шума 1/f будет достаточно. Таким образом, это выглядит как отрицательный результат, и я не уверен, что это улучшает наше понимание системы.

Мы благодарим рецензента за то, что он обратил внимание на то, что непрерывный спектр может иметь несколько источников, включая определенные типы шума. Ссылаясь на наш ответ на первый вопрос рецензента № 1, приведенный выше (см. также рис. 1B), мы считаем, что имеется достаточно доказательств того, что значительное количество высокоранговых мод репрезентативны для крупномасштабной динамики сжатия сети.Однако это не исключает возможности того, что часть спектра (в частности, моды более низкого ранга с меньшими собственными значениями) соответствует шуму и, возможно, некоторой форме локальных сокращений. Фактически, возможность того, что шум играет активную роль в формировании поведения сети, кажется нам интересной особенностью, заслуживающей изучения в будущем. Относительно этого пункта см. также наш ответ на ваш третий пункт ниже.

2. Моды PCA представляют собой приблизительно комбинации плоских 2D-волн, как и ожидается для обычной 2D-системы.Действительно, для большинства двумерных конструкций без специальных расширенных структур можно показать, что Фурье-подобное разложение является оптимальным. Учитывая увеличение волнового числа для увеличения номера моды (как определили авторы, используя мощность/собственные значения), я думаю, что данные указывают на то, что пространственная частота будет более информативной по сравнению с PCA.

Благодарим рецензента за комментарий относительно разложения Фурье как альтернативы разложению на главные компоненты. Хотя рецензент конкретно спрашивает о двумерном случае, мы хотели бы сначала подчеркнуть, что в одномерном анализе главных компонентов эквивалентен разложению Фурье.Это действительно очевидно в нашем PCA-анализе набора данных с одной трубкой, где основные компоненты, показанные на рисунке 5C, точно соответствуют половине периода синусоидальной и косинусоидальной моды Фурье.

В 2D ситуация сложнее по многим причинам. Во-первых, применение разложения Фурье имеет смысл, когда в данных просматривается четкая периодическая структура. Однако в фильмах со светлым полем мы не видим пространственно-периодических паттернов, которые были бы долговременно стабильными. Кроме того, на самом деле существуют улучшенные структуры, заданные морфологией сети, так что мы не можем ожидать, что волны будут распространяться по сети однородно.Однако для нас наиболее важной причиной использования PCA является способность разрешать временную динамику. Хотя в принципе мы могли бы применить 2D-разложение Фурье (отложив на данный момент наши предыдущие причины, по которым мы этого не делали), нам нужно было бы применить анализ Фурье отдельно к каждому кадру в нашем наборе данных. Однако это означало бы, что у нас нет информации о временной эволюции активации режима. Режимы Фурье будут отличаться от одного кадра к другому, и активация крупномасштабных паттернов с течением времени будет скрыта.

По причинам, которые мы перечислили выше, анализ главных компонентов является широко используемым подходом к анализу 2D-систем с временной динамикой. Это справедливо даже для систем с простой геометрией, таких как C. elegans с четкими фурье-подобными модами, где, однако, наиболее важным аспектом анализа является то, как взаимосвязь мод развивается во времени [3]. Мы добавили объяснение преимущества PCA перед разложением Фурье в исправленное Приложение 2.

3.Наиболее интересное открытие авторов представлено на рис. 3, где амплитуды в различных режимах и количество «значимых» режимов связаны с применением стимула. Я полагаю, что авторы действительно показывают, что отклик *не* является простой бегущей волной с двумя состояниями (перистальтический насос), но затем авторы не следуют описанию/пониманию того, что ответ на самом деле *является*. По-видимому, организм задействует гораздо больше способов, чтобы вызвать поведение. Почему эта комбинация требует так много режимов и как она работает? Если отклик на самом деле линейный по форме (или ступенчатый, или что-то еще со многими частотами), разложение Фурье будет включать множество мод (фактически бесконечное число).Я изо всех сил пытаюсь понять, как представленное разложение по моде научило нас тому, как слизевики двигаются или реагируют на раздражители.

Мы благодарим рецензента за вопрос об интерпретации сокращений после применения стимула.

Мы кратко суммируем соответствующие наблюдения из рисунка 3. То, что мы представляем на рисунке 3D, заключается в том, что в течение ~ 25 минут после применения стимула активируется последовательность доминирующих паттернов сокращения . Эти доминирующие паттерны задаются тремя модами с наивысшим рейтингом.Начиная с 85-й минуты, сначала активируется режим 3 (оранжевая линия), затем режим 2 (синяя), затем режим 1 (красный) и, наконец, снова активируется режим 2. Структура этих режимов показана на рисунке 3C. Активация этих доминирующих паттернов перемежается более короткими интервалами времени, когда большое количество режимов примерно одинаково активно. Кроме того, на рисунке 3B мы количественно оцениваем поведение сети и находим поведение движения вверх. Наконец, мы также отмечаем, что мы делаем аналогичные наблюдения для одиночной трубки, представленной на рисунке 5.Таким образом, как и для одиночной трубки, мы обнаруживаем крупномасштабные паттерны сокращения и для сети после применения стимула. Однако из-за их двумерной природы и сложной морфологии сети эти паттерны представляют собой не просто синусоидальные и косинусоидальные волны, как объяснялось в предыдущем пункте. Тем не менее активация определенных режимов колебаний может быть напрямую связана с поведением. Это проиллюстрировано для активации режима 3 розовым прямоугольником, проходящим через подрисунки рис. 3B и D. Детальная количественная оценка скорости потока в сети, связанная с конкретными моделями сокращения, сложна в сложных морфологиях и выходит далеко за рамки нашего исследования.Однако, учитывая структуру мод, можно ожидать, что они будут действовать как насосы, вызывающие перераспределение массы.

Ситуация аналогична для состояний со многими значимыми режимами, отмечающими переходы от одного доминирующего паттерна к другому. В одиночной трубке мы действительно можем сопоставить количество значимых мод с величиной расхода в трубке, который определяет перераспределение массы, см. рис. 4. Большое количество значимых мод связано с малым расходом и, следовательно, малым массовое перераспределение.В этом состоянии моды не складываются, чтобы дать регулярный крупномасштабный паттерн сокращения, но их наложение дает нерегулярные паттерны с коротким масштабом длины. Хотя аналогичная количественная оценка нерегулярных состояний сжатия в сети выходит за рамки этого исследования, мы считаем, что одна из сильных сторон нашей работы заключается в том, чтобы по аналогии с одиночной трубкой рассуждать о том, что многомодовые состояния не приводят к перераспределению массы. . Дополнительные доказательства этого приведены на рис. 2, где мы показываем, что при наличии большого количества значимых мод моды не сильно коррелируют во времени, что опять-таки предполагает, что их наложение не дает регулярных крупномасштабных паттернов, необходимых для большого расхода. .

Мы полагаем, что основная идея нашего открытия заключается в том, что многие режимы используются для создания широкого диапазона поведения, где переход между видами поведения возможен за счет регулировки амплитуды режима. Мы надеемся, что теперь мы проиллюстрировали этот ключевой вывод, пересмотрев рис. 3 и рис. 5, как указано в нашем ответе на последний комментарий рецензента № 1 выше.

Каталожные номера:

1. Крамар, М. и Алим, К.. Кодирование памяти в иерархии диаметров труб живой потоковой сети. Труды Национальной академии наук.2021; 118 (10).

2. Жюльен, Ж.-Д. и Алим, К. (2018) Колебательный поток жидкости влияет на масштабирование волны сжатия в зависимости от размера системы. ПНАС 16 октября 2018 г. 115 (42) 10612-10617.

3. Стивенс Г.Дж., Джонсон-Кернер Б., Биалек В., Рю В.С. Размерность и динамика поведения C. elegans . Вычислительная биология PloS. 2008 г.; 4(4):1-10.

https://doi.org/10.7554/eLife.62863.sa2

2022 Specialized Turbo Vado SL 4.0 Step-Through EQ

Рама

E5 Алюминий, крепление двигателя на нижнем кронштейне, полностью интегрированная батарея в нижней трубе, внутренняя прокладка кабеля, крепления на крыле и переднем багажнике, Smooth Welds

Вилка

Жесткий полностью алюминиевый диск Boost™ 12×110 мм, совместимый с передней стойкой

Стержень

Specialized Stealth Stealth, сплав, 14 градусов, 31.8 мм, встроенное крепление TCD

Лента

Specialized Body Geometry Contour, фиксируемый

Руль

Stout Mini Rise, сплав, угол наклона 9°, подъем 15 мм, высота 31,8 мм

Передний тормоз

Tektro HD-R290, гидравлический диск, 160 мм

Задний тормоз

Tektro HD-R290, гидравлический диск, 160 мм

Рычаги переключения передач

Shimano Deore, Shadow Plus, каркас GS, 10 скоростей

Кассета

Shimano Deore, RapidFire Plus, 10 скоростей с оптическим индикатором передач

Задний переключатель

KMC e10S, 10-ступенчатая, с Missing Link™

Цепь

Shimano Deore, 10 скоростей, 11-42 т

Система шатунов

Praxis, кованый сплав M30, нестандартное смещение

Передние звезды

Праксис, 46T, 110BCD

Педали

Specialized Commuter с липкой лентой и отражателями

Диски

Диск 700C, глубина обода 22 мм, внутренняя ширина 21 мм

Передняя ступица

Диск передней ступицы из специального сплава, герметичные картриджные подшипники, 12×110 мм, Center Lock™, 24 часа

Задняя ступица

Диск задней ступицы из специального сплава, Center Lock™, герметичные картриджные подшипники, 12×148 мм, 28 ч

Передняя шина

Nimbus II Sport Reflect, 700×38 мм

Задняя шина

Nimbus II Sport Reflect, 700×38 мм

Седло

Presta, клапан 40 мм

Внутренние трубы

Bridge Sport, стальные рейлинги, 155 мм

Подседельный штырь

Specialized, сплав, двойной болт, смещение 25 мм, 27.2мм

Крепление сиденья

Специализированный сплав, 30,8 мм

Двигатель

Specialized SL 1.1, изготовленный на заказ облегченный двигатель

Аккумулятор

Specialized SL1-320, полностью интегрированный, 320 Втч

Зарядное устройство

Индивидуальное зарядное устройство, система 48 В с разъемом системного зарядного устройства SL

Жгут проводов

Специализированный жгут проводов с зарядным портом

Фара

Lezyne Ebike Hecto STVZO E65, 210 люмен, 12 В

Задний фонарь

Заднее крыло Lezyne Ebike STVZO, 11 люмен, 12 В

Подножка

Специализированная подножка, крепление 40 мм

Стойка

Стойка Turbo SL, закрытая платформа, прямое крепление на крыло, совместимая с Racktime, 15 кг

Крылья

Specialized DryTech, алюминий

Распределение церамида в модельных липидных мембранах, определенное с помощью нейтронной дифракции

Abstract

Липидный матрикс, присутствующий в самом верхнем слое кожи, роговом слое, играет решающую роль в барьерной функции кожи.Липиды организованы в две пластинчатые фазы. Чтобы лучше понять молекулярную организацию одной из этих ламеллярных фаз, мы провели нейтронографические исследования. На дифракционной картине наблюдались пять порядков дифракции, относящиеся к ламеллярной фазе с повторяющимся расстоянием 5,4 нм. Используя изменение контраста, можно рассчитать профиль плотности длины рассеяния, показывающий типичное расположение двух слоев. Для получения информации о расположении церамидов в элементарной ячейке исследовали также смесь, включающую частично дейтерированный церамид.Профиль плотности длины рассеяния фазы с длиной волны 5,4 нм, содержащей этот дейтерированный церамид, демонстрирует симметричное расположение церамидов с встречно-гребенчатыми ацильными цепями в центре элементарной ячейки.

Введение

Кожа образует границу между человеческим телом и окружающей средой. Он защищает наш организм от различных биологических и химических опасностей, а также от высыхания в сухой среде. Самый наружный слой кожи, роговой слой (SC), образует основной барьер против диффузии веществ через кожу (1).Этот слой состоит из перекрывающихся уплощенных мертвых клеток кожи. Каждая клетка окружена липидами, которые служат раствором между клетками. Липиды образуют несколько слоев пластинок и в основном состоят из церамидов (CER), холестерина (CHOL) и свободных жирных кислот (FFA). Эти классы липидов присутствуют примерно в эквимолярном соотношении (2). Липиды организованы в две ламеллярные фазы с повторяющимися расстояниями ~ 6 и 13 нм, также называемые фазой короткой периодичности (SPP) и фазой длинной периодичности (LPP) соответственно (3–7).Несмотря на высокий уровень ХОЛ, липиды образуют преимущественно кристаллическую латеральную упаковку (4,8). Это отличается от фосфолипидных мембран, в которых высокие уровни CHOL индуцируют образование жидкостно-упорядоченной фазы (9–11). В SC CER являются важным компонентом в формировании ламеллярных фаз, которые выполняют основную барьерную функцию. В предыдущих исследованиях мы в основном сосредоточились на формировании и молекулярной организации LPP (3,4,12–14). В этом исследовании мы сосредоточимся на молекулярной организации SPP.Не только в SC, но и в мембранах живых клеток CER играют важную роль, особенно в формировании липидных рафтов (15,16).

Предыдущие исследования показали, что смеси, приготовленные либо с синтетическим CER, либо с нативным CER, смешанным с CHOL и с FFA, очень точно имитируют липидную организацию SC (17–19). Хотя CER и CHOL играют заметную роль в формировании двух ламеллярных фаз, добавление свободных жирных кислот имеет решающее значение для формирования плотно упакованной орторомбической кристаллической структуры (17, 20).Более детальный анализ состава липидов показал, что СЖК преимущественно насыщены и имеют широкое распределение длин цепей, в которых наиболее обильно присутствуют цепи из 22 и 24 атомов углерода (21).

Кроме того, в SC человека идентифицировано 11 подклассов CER (22–24). Однако в синтетической смеси CER, которую мы использовали в наших предыдущих исследованиях, присутствуют пять подклассов CER, которые точно имитируют состав свиного SC. Эти подклассы состоят либо из сфингозинового (S), либо из фитосфингозинового (P) основания, тогда как ацильная цепь представляет собой негидроксильную цепь ( n ), α -гидрокси (A) или ω -гидрокси цепь (25).Соответствующие негидрокси- и α -гидрокси CER, которые присутствуют в этой синтетической смеси CER, обозначены как CER NP, CER NS, CER AS и CER AP. Молекулярная структура этих CER показана на рис. В синтетической смеси CER, использованной в предыдущих исследованиях, присутствует ω -гидрокси CER (26). Этот CER обладает более длинной ацильной цепью (С30) и имеет линолевую кислоту, химически связанную с его ω -гидроксильной группой (обозначенной ЭО). Обозначается как CER EOS. Используя эти подклассы CER, смешанные с CHOL и FFA, было продемонстрировано, что EOS очень важен для образования LPP и что смеси близко имитируют поведение ламеллярной фазы смесей, приготовленных из изолированного CER человека или свиньи (13,26). .

Молекулярная структура синтетического CER, используемого в смесях.

Хотя вышеупомянутые исследования были очень актуальны для получения информации о роли различных классов липидов в организации липидов, не было получено подробной информации о локализации и молекулярном расположении молекул в элементарной ячейке. В этом отношении в нескольких других исследованиях был достигнут прогресс с использованием упрощенных тройных или четвертичных смесей липидов. Смеси включали в основном CER AP с короткой ацильной цепью из 18 атомов C, CHOL и сульфат холестерина.В этих исследованиях профиль плотности длины рассеяния нейтронов определялся для фаз, богатых CER, с короткой периодичностью (27–29). В некоторых исследованиях также были включены CER EOS и одиночная (дейтерированная) жирная кислота, что позволило локализовать дейтерированную жирную кислоту в элементарной ячейке фаз, образованных этими упрощенными смесями (29).

В этой статье мы более подробно исследуем SPP SC, используя сложную липидную смесь синтетических CER, CHOL и FFAs, которая точно имитирует SPP, наблюдаемую в роговом слое (18).Цель состоит в том, чтобы получить информацию о локализации и конформации CER NS в SPP. Мы выбрали CER NS, потому что это самый распространенный подкласс CER в модельной смеси. Поскольку ЭОС КВР имеет решающее значение для образования НПП (31), он исключен из этих смесей. В исследованиях, направленных на изучение конформации и локализации НС CER в SPP, часть NS CER заменена NS CER с пердейтерированной ацильной цепью (dCER NS). Во-первых, профиль плотности длины рассеяния нейтронов SPP определяется с использованием изменения контраста.Во второй части наших исследований информация о расположении НС КЭР в элементарной ячейке ППП получена с использованием его частично дейтерированного аналога.

Материалы и методы

Материалы

Синтетические CER NS (C24), dCER NS (C24), Cer NP (C24), CER AS (C24), CER NP (C16) и CER AP (C24) были щедро предоставлены Cosmoferm (Делфт, Нидерланды). Число, указанное в скобках, обозначает количество атомов углерода (С) в ацильной цепи церамидов.Все исследованные липиды были насыщенными по ацильной цепи. Пальмитиновая кислота (С16:0), стеариновая кислота (С18:0), арахиновая кислота (С20:0), бегеновая кислота (С22:0), трикозановая кислота (С23:0), лигноцериновая кислота (С24:0), церотиновая кислота буферные соли кислоты (C26:0), холестерина и ацетата были приобретены у Sigma-Aldrich Chemie (Schnelldorf, Германия). Кремниевые подложки были вырезаны из пластины (P/Boron (110), толщина 380 ± 10 мкм мкм), полученной от Okmetic (Вантаа, Финляндия). Все используемые органические растворители были аналитической чистоты и произведены Labscan (Дублин, Ирландия).Используемая вода была качества Millipore.

Приготовление липидных моделей

Для приготовления модели с протонированными липидами использовали синтетические CER, CHOL и FFA. Был выбран следующий синтетический состав CER (см. также): CER NS C24, CER NP C24, CER AS C24, CER NP C16 и CER AP C24 в мольном соотношении 60:19:5:11:6, которые, кроме отсутствие CER EOS очень напоминает состав CER в SC свиньи (32). Для смеси свободных жирных кислот (СЖК) был выбран следующий состав: С16:0, С18:0, С20:0, С22:0, С23:0, С24:0 и С26:0 при молярном соотношении 1.8, 4,0, 7,7, 42,6, 5,2, 34,7 и 4,1 соответственно. Это распределение длин цепей основано на составе СЖК в человеческом СК (21). Для достижения желаемого соотношения CER/CHOL/FFA 1:1:1 для каждой модели соответствующие количества индивидуальных липидов растворяли в хлороформе/метаноле (2:1) и объединяли в один раствор с конечной концентрацией липидов ~10 мг/мл. Этот раствор распыляли на поверхность размером 1 × 3,8 см 2 на кремниевой подложке с помощью аппликатора образцов Camag Linomat IV (Muttenz, Швейцария).Скорость распыления составляла 5 мкл л/мин, и растворитель выпаривали потоком газообразного азота. Затем кремниевую подложку с нанесенной липидной пленкой дважды уравновешивали в течение 10 мин при температуре ~80°C. После каждого этапа нагрева образец охлаждали до комнатной температуры в течение ~30 мин. После уравновешивания липидный слой погружали в ацетатный буфер (50 мМ, pH 5) и выдерживали при 37°C в течение 24 ч для достижения максимальной гидратации. После этапа гидратации образец выдерживали при 100% относительной влажности до измерения с помощью нейтронной дифракции.Такая подготовка образцов приводит к ориентированным мультислоям с низкой мозаичностью, как показано на рис.

Профиль нейтронной дифракции дейтерированного образца при 100% RH с буфером 100% D 2 O. Рефлексы SPP обозначены римскими цифрами I–III, а рефлекс кристаллического CHOL указан звездочкой.

Тот же метод приготовления был использован для модели, в которой 30 мольных % CER NS были заменены на dCER NS. Этот дейтерированный образец содержит всего 2.5 мольных % дейтерированных липидов. Для определения знаков структурных факторов использовали ацетатные буферы, содержащие 0, 33, 67 и 100% D 2 O. Когда нейтронографическое измерение образца при выбранном соотношении H 2 O/D 2 O было завершено, образец подвергали воздействию буфера с другим соотношением H 2 O/D 2 O в течение периода 24 ч при 37 °C, а затем устанавливали в камеру для следующего нейтронографического измерения. Эту процедуру повторяли до тех пор, пока образец не был измерен со всеми четырьмя концентрациями буфера H 2 O/D 2 O.

Взвешивание образцов для определения уровня гидратации

Для определения степени гидратации смесей все образцы взвешивали в сухом состоянии (24 ч обезвоживания в течение P 2 O 5 ), а затем в полностью гидратированном состоянии (см. процедуру выше) с использованием микровесов Sartorius SE 2 (Nieuwegein, Нидерланды). Это выполняли как для протонированных (в двух экземплярах), так и для дейтерированных образцов (в трех экземплярах), и процедуру взвешивания каждого образца повторяли три раза.

Эксперименты по дифракции рентгеновских лучей

Перед проведением нейтронографических измерений температура уравновешивания и период уравновешивания смесей липидов во время приготовления образцов были оптимизированы для образования только одной ламеллярной фазы с максимальной ориентацией параллельно кремниевой подложке. Образцы измеряли с помощью рентгеновской дифракции. Использовался дифрактометр X’pert Pro-Alpha от PANalytical (Almelo, Нидерланды), оснащенный герметичной медной рентгеновской трубкой, первичной и вторичной щелями Соллера 0,01 рад и эллиптическим зеркалом, создающим сходящийся пучок Cu . 1 и 2 излучения с длинами волн соответственно 1.5406 и 1,5444 Å. Анализ одномерных дифракционных картин был таким же, как описано ранее (19).

Нейтронографические эксперименты

Эксперименты выполнены на дифрактометре D16 в Институте Лауэ-Ланжевена (ILL, Гренобль, Франция) при λ  = 4,75 Å в режиме отражения. Образцы устанавливали на гониометр, помещенный в герметичную алюминиевую камеру влажности с регулируемой температурой, в присутствии ацетатной буферной ванны для поддержания постоянной максимальной влажности.Температуру в камере во время измерений поддерживали на уровне 25°С. Расстояние от образца до детектора составляло 1,0 м. Интенсивность дифрагированного луча регистрировали позиционно-чувствительным двумерным детектором 3 He с 128 × 128 каналами и разрешением между каналами 2 мм. Показания двухмерного детектора были интегрированы в вертикальном направлении, что дает одномерную проекцию интенсивности в зависимости от положения канала детектора (2 θ ).

Интенсивности на поверхности детектора были скорректированы путем нормализации по калибровке по воде и вычитанием фона пустой камеры.Время измерения одного образца варьировалось от 7 до 12 часов в зависимости от отношения сигнал/шум во время измерений. Более длительное время измерения использовалось для более высоких порядков дифракции (т.е. 3–5). Ламеллярное расстояние ( d ) было получено путем подгонки положений пиков (в 2 θ ) всех порядков дифракции ( h ) в соответствии с законом Брэгга: 2 d sin θ  = hλ6. Анализ данных был выполнен с использованием собственного программного обеспечения ILL LAMP (33).Поскольку было невозможно интегрировать по всему диапазону ω (из-за отсечки подложкой и из-за используемого в измерениях диапазона ω ), мы решили интегрировать только пиковые интенсивности, исходящие от ламелей. — ориентированы параллельно кремниевой подложке. Это было достигнуто путем выбора только малоугловой высокоинтенсивной части дифракционных пиков при поворотах образца Ω = -0,1, 0,0 и +0,1° вокруг угла Брэгга (см. также ). Суммирование этих интенсивностей пикселей привело к общему пиковому значению интенсивности ( I h ).Используя этот метод интеграции, мы получаем отличное соотношение сигнал/шум. Тогда амплитуды структурных факторов | F ч | были рассчитаны из общей пиковой интенсивности ( I h ) по

, где A h – поправочный коэффициент для поглощения образца, который можно рассчитать по формуле (34)

Ah(θ)=1/ sinθ2µL[1−exp(−2µLsinθ)].

(2)

В этом уравнении θ — угол Брэгга, μ — линейный коэффициент ослабления и L — толщина липидной пленки.При плотности липидов ~0,87 г/см 3 и массе 10 мг на площади 3,8 см 2 толщина липидной пленки ( L ) по расчетам составляет ~30 мк мкм. Линейный коэффициент затухания рассчитывали исходя из используемой длины волны в сочетании с плотностью и химическим составом липидной пленки (35). Для протонированного образца мк колеблется от 5,48 до 5,09 см -1 для 0–100% D 2 O соответственно, а для дейтерированного образца мк  = 5.от 03 до 4,65 см -1 . Ошибка в | F ч | определяли из стандартного отклонения суммированных интенсивностей пикселей ( σ I ) по

Δ|Fh|=Ah⋅σIh3h⋅Ih.

(3)

Если элементарная ячейка бислоя ППП центросимметрична, фазы структурных факторов равны либо 0, либо π . В этой ситуации структурные факторы демонстрируют линейную корреляцию как функцию отношения H 2 O:D 2 O (34).Для гидратированного бислоя можно предположить, что вода распределяется вблизи гидрофильных головных групп, на границах элементарной ячейки. Математически гауссово распределение воды на границах элементарной ячейки (± 90 335 d 90 336 /2) приводит к тому, что знаки структурного фактора для водного слоя равны — + — + -. Поскольку структурные факторы воды определяются как структурные факторы при 100% D 2 O за вычетом этого при 100% H 2 O, знаки структурных факторов можно определить по графику H 2 O/ D 2 O контраст в зависимости от полученных амплитуд структурных факторов | Ф ч |.Процедура следующая: знак F h должен быть выбран так, чтобы F h при 100% D 2 O минус F h 2 при 0% D 2 результаты в правильном знаке для h th порядка структурного фактора водного слоя.

После определения знаков фазы структурного фактора профиль плотности длины рассеяния нейтронов для бислоя SPP, ρ ( x ), может быть рассчитан с помощью преобразования Фурье структурных факторов (36),

ρ( x)=2d∑hFhcos(2πhx/d),

(4)

, где x — направление нормали к поверхности двойного слоя.Значимость особенностей профиля плотности можно представить по ошибке плотности длины рассеяния, отображаемой уравнением (37)

Δρ(x)=2td[∑h(ΔFh)2cos2(2πhx/d)]1/ 2,

(5)

, где t t – статистика Стьюдента. Ошибка в структурных факторах (Δ F h ) определялась по уравнению. 3. Доверительный интервал 99,7% для плотности длины рассеяния был получен с использованием статистики Стьюдента t t = 2.97.

Кроме того, после нормализации картин путем установления суммы амплитуд структурных факторов ( F 1 F 5 ) равной для протонированного и дейтерированного образца, разностный профиль плотности (результирующий из дейтерированных хвостов CER NS) можно рассчитать, вычитая плотность протонированного образца из плотности дейтерированного образца. Чтобы получить абсолютное масштабирование для диаграмм плотности, необходимо определить общую плотность длины рассеяния ( F 0 ) и получить дополнительную информацию об особенностях диаграммы разности плотности. F 0 рассчитывали, используя химический состав и массовую плотность образца (38,39).

Результаты

Оптимальная подготовка образцов

Перед проведением нейтронных измерений образцы оценивали с помощью измерений рентгеновской дифракции, чтобы убедиться в правильности ламеллярной организации и ориентации. Наша первоначальная процедура двукратного уравновешивания образцов в течение 1 ч при температуре немного выше начала плавления с последующим охлаждением до комнатной температуры приводила не только к отражениям, приписываемым ППП, но и к отражениям, приписываемым дополнительной фазе с повторением расстояние 4.4 нм (см. рис. S1 A во вспомогательных материалах). Для более детального изучения образования этой дополнительной фазы образец нагревали, при этом снимали дифракционные кривые. При 80°С исчезают дифракционные пики, приписываемые этой дополнительной фазе. Последующее охлаждение до комнатной температуры привело к получению дифракционной картины с отражениями, приписываемыми SPP с повторяющимся расстоянием 5,4 нм и только кристаллическим CHOL (см. рис. S1 B ). На основании этих результатов смеси липидов для нейтронографических исследований уравновешивали в течение 10 мин при температуре ~80°C.

Количество молекул воды на молекулу липида

Увеличение концентрации D 2 O в гидратационном буфере привело к умеренному увеличению сигнала рассеяния нейтронов, что указывает на то, что в образце присутствует относительно небольшое количество молекул воды. Для определения количества воды в образцах образцы взвешивают на микровесах в сухом и гидратированном состоянии. Как и ожидалось, между протонированными и дейтерированными образцами не наблюдалось различий в уровне гидратации.Результирующее молярное отношение вода/липид, определенное взвешиванием, составляет 1,91 ± 0,42, что свидетельствует о том, что в смесях липидов на одну молекулу липида приходится ~2 молекулы воды.

Нейтронограмма

В приведен типичный пример дифрактограммы смеси, содержащей dCER NS, гидратированный при 100% D 2 O. Три рефлекса, которые можно отнести к ППП, видны при углах рассеяния 2 θ  = 5,13, ​​10,16 и 15,29°, что соответствует повторному расстоянию d  = 5.36 ± 0,04 нм. Кроме того, один рефлекс, приписываемый кристаллическому CHOL, виден при 2 θ  = 8,0°. Максимум интенсивности третьего порядка дифракции ППП не виден в , так как он расположен при повороте образца Ω = 7,65°, который регистрируется во втором положении детектора (не показано). Дифракционная картина SPP показывает очень острые пики, указывающие на то, что большее количество липидных ламелей ориентировано параллельно поверхности подложки по сравнению с другими ориентациями. Мозаичность параллельно упорядоченных ламелей была рассчитана (принимая полную ширину на полувысоте гауссовой подгонки к острому пику в Ω для порядков 1–5) равной 0.275 ± 0,014°. Очень похожая картина наблюдается для протонированного образца. Интенсивность второго отражения CHOL слишком мала, чтобы его можно было увидеть, и его максимальная интенсивность приходится на более высокий угол поворота образца, равный Ω = 8,0°, что также зафиксировано во втором положении детектора. После интегрирования пика в этом втором положении детектора был определен второй порядок CHOL при 2 θ  = 16,0°. Это отражение не перекрывалось с отражением третьего порядка ППП.

Определение знаков фазы

Абсолютные амплитуды структурных факторов с соответствующими ошибками и поправочными коэффициентами поглощения рассчитываются из дифракционных картин с использованием формул.1–3. Они предоставлены в . Как видно из таблицы, ошибки в амплитудах структурных факторов невелики. Линейные аппроксимации амплитуд структурных факторов с отношением H 2 O/D 2 O показаны в , A и B для протонированного и дейтерированного образца соответственно. Из этих подгонок видно, что структурные факторы линейно коррелируют с отношением H 2 O/D 2 O, демонстрируя, что липиды в SPP образуют центросимметричную структуру, и это также верно, когда CER NS частично заменен на dCER NS.Кроме того, наблюдаются четкие различия между структурными факторами протонированного образца и дейтерированного образца, что указывает на различие их профилей плотности длины рассеяния.

( A ) Линейная аппроксимация амплитуд структурных факторов протонированного образца с отношением H 2 O/D 2 O в гидратационном буфере. ( B ) Линейная корреляция амплитуд структурного фактора дейтерированного образца с отношением H 2 O/D 2 O.Столбики погрешностей представляют собой стандартные отклонения.

Таблица 1

Амплитуды структуры фактора с ошибками и коррекции поглощения

80.82 ± 0,13

[D 2 O] F (1) A 1 F (2) A 2 F (3) 9 3 F (4) F (4) 9 4 F (5) F 5
Протонирование 0% 41.23 ± 0,08 1,191 19,67 ± 0,13 1,094 13,99 ± 0,09 1,063 14,17 ± 0,11 1,047 5,19 ± 0,25 1,038
33% 62,83 ± 0,11 1.186 33.72 ± 0,08 1.092 1.092 22.65 ± 0,08 1.061 24,52 ± 0,08 1.046 12.65 ± 0.11 1.037
67% 1,182 46,56 ± 0,10 1,090 33,91 ± 0,09 1,060 33,27 ± 0,08 1,045 18,37 ± 0,10 1,036
100% 97,22 ± 0,15 1.177 58.39 ± 0.11 1.088 42.64 ± 0,08 1.058 1.058 40.96 ± 0,07 1.044 24,93 ± 0,06 1.035
0% 43.68 ± 0,11 1,175 26,04 ± 0,09 1,087 13,99 ± 0,09 1,058 18,03 ± 0,11 1,043 6,10 ± 0,22 1,035
Deuteratedsample 33% 57.52 ± 0.11 1.170698 1.170 39.33 ± 0.11 1.084 22.45 ± 0,08 1 22.45 ± 0,08 1,056 25.056 25.056 1.042 9.80 ± 0.24 1.034
67% 64.57 ± 0,13 1,166 44,72 ± 0,10 1,082 25,97 ± 0,08 1,055 30,60 ± 0,10 1,041 14,21 ± 0,09 1,033
100% 81,48 ± 0,15 1.161 59.71 ± 0.14 1.080 35.96 ± 0,08 1.053 38.053 38.48 ± 0.10 1.040 19.56 ± 0.11 1.032

. O/D 2 O строится следующим образом: Гауссово распределение воды предполагается вблизи головных групп липидов на границах элементарной ячейки (± d /2).Знаки фаз для структурных факторов этого слоя воды, согласно его распределению, — + — + -. Впоследствии, поскольку структурные факторы водного слоя определяются как общие структурные факторы при 100% D 2 O за вычетом тех, что при 0% D 2 O, можно вывести знаки фазы структурного фактора для протонированного и дейтерированного образца (см. , А и В ). Поскольку амплитуды структурного фактора при 100% D 2 O in , A и B выше, чем при 0% D 2 O, знаки структурного фактора как протонированного, так и дейтерированного образца также различаются. − + − + − для порядков дифракции 1–5 соответственно.

Профили плотности длины рассеяния

Профили плотности длины рассеяния нейтронов SPP при 0% концентрации D 2 O в протонированном и дейтерированном образце были рассчитаны по уравнению. 4. Профили показаны в , A и B для протонированного и дейтерированного образца, соответственно, с доверительным интервалом 99,7%, рассчитанным по уравнению. 5. Профиль протонированного образца показывает высокую плотность на границах элементарной ячейки, низкую плотность в центре и субмаксимум при -1.5 и +1,5 нм от центра. Минимумы в профиле расположены на -0,75 и +0,75 нм от центра. Профиль дейтерированного образца очень похож на профиль протонированного образца, за исключением повышенной плотности в центре элементарной ячейки.

( A ) Профиль плотности длины рассеяния SPP в протонированном образце ( сплошная линия ). ( B ) Профиль плотности длины рассеяния SPP в дейтерированном образце ( сплошная линия ). ( Пунктирные линии ) 99.7% доверительный интервал.

Затем оба образца плотности нормализуются и вычисляется разностный образец плотности путем вычитания протонированного из дейтерированного образца. Этот разностный профиль представляет собой плотность дейтерированных ацильных цепей. Полученная разностная картина показывает повышенную плотность в центре элементарной ячейки. Чтобы представить картины плотности в абсолютной шкале, как описано в «Материалах и методах», мы используем информацию о молекулярной структуре, заданную формой картины разностной плотности, следующим образом: dCER NS дейтерирован по всей длине ацильной цепи ( Д47).Поскольку ацильная цепь также расположена в области головной группы (см. ), а межмембранное пространство очень мало (~ 0,1 нм), ожидается, что плотность длины рассеяния нейтронов будет увеличиваться по всей длине элементарной ячейки. Поскольку форма картины разностной плотности показывает возвышение только в центре элементарной ячейки, это указывает на переплетение дейтерированных ацильных цепей в центре элементарной ячейки. Мы используем эту информацию для масштабирования разностной картины таким образом, чтобы плотность (DH) в центре элементарной ячейки (в результате двух перекрывающихся ацильных цепей) была точно в два раза выше плотности в оставшейся части элементарной ячейки (в результате одной ацильной цепи). цепь).В протонированных, дейтерированных и разностных структурах плотности отображаются в абсолютной шкале плотности. Следует подчеркнуть, что процедура масштабирования не влияет на вид картины разностной плотности, а только на диапазон плотности длины рассеяния по оси y .

Профили плотности по длине рассеяния SPP в протонированном образце ( сплошная линия ) и дейтерированном образце ( пунктирная линия ) и их разностный профиль ( пунктирная линия ) в шкале абсолютной плотности.Представлено также возможное расположение молекул dCER NS в бислое SPP.

Обсуждение

В СК человека липиды образуют две пластинчатые фазы, называемые LPP ​​и SPP (3–7,40). Совсем недавно профиль электронной плотности элементарной ячейки в LPP был рассчитан с помощью рентгеноструктурных исследований (14). Эти исследования показали, что в элементарной ячейке ЛПП липиды организованы в три слоя, почти равных по ширине. Такое расположение липидов, очень характерное для организации липидов в SC, диктуется молекулярной архитектурой CER EOS.Эти исследования также показали, что липидная организация смесей, приготовленных либо из синтетических смесей CER, либо из изолированных смесей CER, очень похожа на таковую в SC не только в отношении повторяющихся расстояний липидных фаз, но и в отношении профиля электронной плотности. элементарной ячейки LPP. Целью этого исследования было получить более полное представление о молекулярной структуре SPP.

Хорошо известно, что повторяющиеся расстояния ламеллярных фаз в смесях, приготовленных из CER, CHOL и FFA, очень нечувствительны к гидратации и что особенно для SPP с помощью рентгеновской дифракции получают только ограниченное число порядков дифракции.Поэтому трудно получить профиль электронной плотности с помощью рентгеноструктурного анализа. Кроме того, используя дейтерированный липид в нейтронных экспериментах, можно получить информацию о расположении этого липида в элементарной ячейке. По этой причине было решено провести нейтронографические исследования, так как это позволяет варьировать контраст путем изменения отношения H 2 O/D 2 O для получения фазовых знаков структурных факторов различных порядков дифракции. Используя этот метод, мы смогли рассчитать профиль плотности длины рассеяния ППП.Однако наша конечная цель — получить информацию о расположении КСВ в элементарной ячейке. Поэтому мы частично заменили (наиболее распространенную) CER NS в липидной смеси на dCER NS, чтобы определить положение ацильной цепи в элементарной ячейке. Насколько известно авторам, это первые измерения дифракции нейтронов, зарегистрированные для смеси липидов, которые точно имитируют SPP в SC.

В наших предыдущих исследованиях методом рентгеновской дифракции на смесях с ХЭВ, ХОЛ и СЖК, приготовленных в отсутствие ЭОС ХЭВ, удалось сформировать ППП и частично фазово-разделенные кристаллические ХГОЛ без присутствия дополнительных фаз.Однако при подготовке образцов для нейтронографических экспериментов, в которых в качестве несущей подложки использовался кремний, метод уравновешивания пришлось корректировать, чтобы получить только ППП и фазово-разделенные кристаллические ХОЛ. Наши исследования показывают, что образования дополнительной фазы размером 4,4 нм можно избежать, уравновешивая образец при ∼10°C выше области плавления липидной смеси. Присутствия ХОЛ не избежать, так как фазово-разделенные кристаллические ХОЛ также присутствуют в СК (3, 4, 41) и дифракционные пики ХОЛ не мешают пикам ПФП.В предыдущих исследованиях было показано, что при соотношении CER/CHOL/FFA 1:0,4:1 CHOL включается в ламеллярные фазы (неопубликованные данные). Отсюда можно заключить, что ХОЛ частично растворяется в пластинчатых фазах. В исследованиях с использованием смесей только с несколькими CER, CHOL и одной жирной кислотой сообщалось о фазовом разделении фракции жирных кислот (29, 42, 43). Однако смеси в последних исследованиях содержали меньшее количество подклассов CER и только одну жирную кислоту. Либо несоответствие между длинами цепей CER и жирных кислот, либо другая процедура уравновешивания, скорее всего, вызывает фазовое разделение в этих смесях.Мы не только измерили ламеллярные фазы наших смесей, но также исследовали латеральную упаковку с помощью инфракрасной спектроскопии (неопубликованные результаты). Не было никаких признаков фазового разделения между FFA и CER в боковой упаковке SPP. Это свидетельствует об образовании достаточно однородных смесей не только в отношении ламеллярного поведения фаз, но и в отношении латеральной упаковки.

Уровень гидратации смесей липидов

В предыдущих исследованиях на моделях SC или SC липидов было замечено, что даже при 100% влажности повторяющееся расстояние между липидными ламелями почти не зависит от уровня гидратации, что позволяет предположить, что очень мало воды присутствует в области головной группы (12,18,44).Наши исследования показывают, что на основе измерений веса на одну молекулу липида приходится ~2 молекулы воды. Это очень низкий уровень гидратации по сравнению с бислоями фосфолипидов, которые могут содержать до 12 (в гелевой фазе) или даже 35 (в жидкой фазе) молекул воды на молекулу липида (36). В родственном исследовании модельной смеси SC с CER EOS, CER AP, CHOL и пальмитиновой кислотой количество молекул воды на молекулу липида было оценено как всего 1, исходя из доступного межмембранного пространства и молекулярного объема H . 2 О (29).Из-за ограниченного количества воды в области головной группы смеси, содержащие церамиды, менее чувствительны к изменению контраста H 2 O/D 2 O. Однако в данном исследовании изменение значений структурного фактора было значительным при повышении уровня D 2 O от 0 до 100%. Это позволило определить знаки фаз и с высокой точностью рассчитать профиль плотности длины рассеяния нейтронов для ППП. Из-за низкого содержания воды в смесях липидов было принято решение гидратировать образцы при 100% влажности.

Низкий уровень гидратации смесей, содержащих CER, означает, что уровень гидратации липидного матрикса СК ​​также очень низок по сравнению с фосфолипидными слоями клеточной мембраны. Что касается барьерной функции липидной матрицы в SC, поскольку количество молекул воды в области головной группы очень мало, ожидается, что проникновение гидрофильных молекул будет значительно снижено по сравнению с кристаллическими фосфолипидными мембранами. Таким образом, очень низкий уровень гидратации липидного матрикса СК ​​может играть важную роль в барьерной функции кожи.

Двухслойная структура СПП и расположение НС КЭР в элементарной ячейке

При рассмотрении профилей плотности длины рассеяния для элементарной ячейки СПП высокая плотность располагается на границах элементарной ячейки, а низкая плотность в центре. Это свидетельствует о том, что головные группы липидов расположены на границах элементарной ячейки, тогда как углеводородные цепи расположены в центре. Это похоже на формирование типичного липидного двойного слоя, обусловленного гидрофобно-гидрофильными взаимодействиями, что часто наблюдается для фосфолипидных мембран (45-47).Кроме того, экспериментально полученное расстояние между повторами 5,36 нм превосходно согласуется с двухслойным расположением двух молекул CER: общая длина расширенного основания сфингозина C18 и ацильной цепи C24, если принять длину 0,127 нм на связь CC, составляет 5,33 нм. (48). Поэтому вполне вероятно, что подклассы CER с длиной ацильной цепи C24 (90% CER) диктуют расстояние повторения элементарной ячейки SPP в наших системах. Это соответствует нашим предыдущим выводам о том, что CER диктует формирование ламеллярных фаз в SC (14,31,49).В исследовании McIntosh et al. (44) на смеси с выделенным КВР из СК свиньи, состоящей из КВР/ХОЛ/пальмитиновой кислоты в молярном соотношении 2:1:1, также наблюдался ППП с расстоянием повторения 5,4 нм. В исследовании, проведенном нашей группой с использованием аналогичных смесей с выделенными свиными CER, CHOL и FFA, SPP наблюдался с повторяющимся расстоянием 5,2–5,4 нм в зависимости от соотношения CER/CHOL и присутствия FFA (31). Поскольку смеси в обоих исследованиях были приготовлены в отсутствие ЭОС СЭР свиньи, но с оставшимся СЭР, выделенным из СК свиньи, наблюдение 5.Расстояние повторения 4 нм равно таковому в наших синтетических смесях, что позволяет предположить, что SPP в наших смесях очень похож на SPP, присутствующий в смесях, приготовленных с изолированным CER.

В родственном нейтронографическом исследовании смеси с CER AP, CHOL, сульфатом холестерина и пальмитиновой кислотой был представлен профиль плотности для двухслойной структуры с меньшей фазой периодичности 4,56 нм (27). В этом профиле наименьшая плотность расположена точно в центре элементарной ячейки, тогда как в нашем профиле наименьшая плотность расположена вне центра на расстоянии ±0.75 нм. Это различие может быть объяснено различными используемыми CER: ацильные и сфингозиновые цепи в смеси CER AP имеют одинаковую длину (обе C18), и, таким образом, не ожидается никакого переплетения. Следовательно, в смеси CER AP концевые метильные группы расположены в центре двойного слоя, что приводит к образованию в этом месте области с низкой плотностью. Напротив, в наших смесях ацильные и сфингозиновые цепи не имеют одинаковой длины и составляют С24 и С18 соответственно. Эта разница в длине цепи, вероятно, приводит к переплетению ацильных цепей, что может объяснить слегка повышенную плотность, наблюдаемую в центре элементарной ячейки.Это продемонстрировано на , где показано расположение молекул dCER NS (более подробно обсуждается ниже). Взаимодигитирование согласуется с областями более низкой плотности по обе стороны от повышенной плотности в центре элементарной ячейки (при ±0,75 нм), поскольку эти минимумы коррелируют с положениями концевых групп CH 3 ацильной и сфингозиновые цепи.

Субмаксимумы в профиле плотности длины рассеяния, расположенные на расстоянии -1,5 и +1,5 нм от центра элементарной ячейки, могут быть связаны с наложением ХОЛ и метиленовых цепей CER и FFA.Это похоже на субмаксимумы, наблюдаемые в профиле смеси CER AP на расстоянии ± 1,3 нм от центра элементарной ячейки, которые также коррелируют с наложением метиленовых цепей и CHOL (32). Ранее для молекул фосфатидилхолина с неравными длинами цепей C10 и C18 также было предложено двухслойное расположение с переплетенными цепями (45), подтверждающее наше расположение для CER.

Что касается расположения CER в бислое, в предыдущих исследованиях предлагалось асимметричное полностью расширенное расположение для CER NP (50,51).Из наших данных можно сделать вывод о том, имеет ли место асимметричное расположение в смесях, приготовленных с CER, CHOL и FFA.

Прежде всего, величина структурных факторов линейно коррелирует с концентрацией D 2 O, что наблюдается только в системах с центросимметричной элементарной ячейкой. При работе только с протонированными смесями это наблюдение не дает окончательной информации, так как и в асимметричной полностью вытянутой конфигурации CER ожидается симметричная элементарная ячейка.Однако, когда смесь готовится с dCER NS, асимметричная полностью вытянутая конфигурация CER приведет к асимметричному распределению плотности дейтерированных хвостов (см. A ). Но поскольку при использовании этой смеси наблюдается линейная зависимость между структурными факторами и концентрацией D 2 O, должна присутствовать симметричная элементарная ячейка.

( A ) Схема асимметрично расположенных полностью вытянутых НС dCER в элементарной ячейке СПП. ( B ) Симметричное расположение полностью вытянутых молекул dCER NS в элементарной ячейке SPP.( C ) Симметричное расположение в элементарной ячейке с dCER NS в конфигурации шпильки. Только в компоновках, представленных на панелях B и C , дейтерированные ацильные цепи переплетаются друг с другом, что приводит к различному профилю, который также показан на рисунке.

Во-вторых, повышенная плотность, наблюдаемая в центре профиля НС дКВЭ, может быть результатом только переплетения хвостов НС дКВЭ в центре элементарной ячейки, что возможно только при предположении симметричного расположения НС КВЭР.Поэтому КВР необходимо располагать симметрично, либо в шпильке, либо в полностью вытянутой конфигурации.

Эти два устройства схематически изображены в , B и C . Однако по текущим данным невозможно определить, находится ли НС КВР в полностью вытянутой конфигурации или в конфигурации шпильки по следующим причинам: В смесях, содержащих КВР, уровень воды между головными группами составляет ∼2 вод. молекул на липид, что приводит к очень маленькому межмембранному пространству.Кроме того, ожидаемая ширина одной развернутой головной группы (полностью вытянутая конформация) почти равна ожидаемой ширине двух головных групп в конформации шпильки. Следовательно, учитывая, что максимальное разрешение в профиле плотности длины рассеяния составляет 0,54 нм ( d /2 ч макс ), а полная ширина на полувысоте области высокой плотности в элементарной ячейке составляет 1 нм, невозможно различить эти две конфигурации. Таким образом, молекулы CER в бислойной структуре SPP могут находиться как в шпильке, так и в полностью вытянутой конфигурации.

Наши исследования показывают, что формируется ламеллярная фаза размером 5,4 нм, состоящая из гомогенно смешанных CER, CHOL и FFA. Это важно для барьерной функции кожи, поскольку разные липидные домены могут приводить к увеличению коэффициента диффузии в этих липидных мембранах. Кроме того, низкий уровень гидратации ламеллярной фазы свидетельствует о плохом гидрофильном пути, который сводит к минимуму проникновение гидрофильных соединений через эти ламеллярные фазы. Кроме того, симметричное расположение, наблюдаемое для двухслойного расположения SPP, за исключением полностью расширенного асимметричного расположения, также может существовать в LPP, поскольку эта фаза готовится с использованием тех же подклассов CER, за исключением CER EOS, присутствующего только в LPP. .

Мы можем сравнить наши результаты, полученные для CER в моделях липидов SC, с ролью CER в клеточных мембранах: ранее были исследованы монослои CER/CHOL в различных соотношениях, чтобы получить представление о формировании липидных рафтов (52). В этом исследовании был сделан вывод, что смеси CER/CHOL образуют кристаллическую фазу с CER, имеющим структуру шпильки. Это согласуется с нашими выводами для смеси CER/CHOL/FFA и может свидетельствовать о том, что конфигурация в виде шпильки предпочтительнее, чем полностью вытянутая конфигурация CER.

tero.design — Terodesign

Генератор доменных имен


teroreverse.design, terocapital.design, terostandard.design, terointegra.design, terolove.design, terorunners.design, teroup.design, teroaim.design, teroprogressive.design, terorock.design, terocrunch.design, terocove.design, terogrow. дизайн, terogems.design, teroplasma.design, terohuge.design, terocombat.design, teroscout.design, teronew.design, terogulf.design, teronetwork.design, terohigh.design, teroarrow.дизайн, teropower.design, terofinancial.design, teromighty.design, terorail.design, teroorbit.design, teromaster.design, terocognitive.design,

Ошибки


Орфографические ошибки при поиске в Интернете tero.design .

www.ero.design, www.tr5ero.design, www.r5ero.design, www.tfero.design, www.fero.design, www.tttero.design, www.ttero.design, www.trero.design, www. rero.design, www.tzero.design, www.zero.design, www.t4ero.design, www.4ero.дизайн, www.t6ero.design, www.6ero.design, www.tro.design, www.te1ro.design, www.t1ro.design, www.te2ro.design, www.t2ro.design, www.tecro.design, www.tcro.design, www.tefdro.design, www.tfdro.design, www.tegro.design, www.tgro.design, www.tehro.design, www.thro.design, www.te5ro.design, www. t5ro.design, www.teo.design, www.teredo.design, www.teedo.design, www.terfo.design, www.tefo.design, www.terco.design, www.teco.design, www.tervo. дизайн, www.tevo.design, www.ter45o.design, www.te45o.design, www.terzo.design, www.tezo.design, www.ter4o.design, www.te4o.design, www.ter.design, www.tero8.design, www.ter8.design, www.tero7.design, www.ter7. дизайн, www.teroli.design, www.terli.design, www.teroop.design, www.terop.design, www.tero9.design, www.ter9.design, www.tero0.design, www.ter0.design, www.tero.design, www.ter.design, www.tero.designb, www.tero.desigb, www.tero.designg, www.tero.desigg, www.tero.designh, www.tero.desigh, www. tero.designj, www.tero.desigj, www.tero.designm, www.tero.desigm, www.tero.design, www.tero.desig, www.tero.desigfn, www.tero.desifn, www.tero.desigrn, www.tero.desirn, www.tero.design, www.tero.desin, www.tero. дизайн, www.tero.desihjn, www.tero.desigvn, www.tero.desivn, www.tero.design, www.tero.desi n, www.tero.desig yn, www.tero.desi yn, www. tero.desig.n, www.tero.desi.n, www.tero.desigcn, www.tero.desicn, www.tero.desiujgn, www.tero.desujgn, www.tero.desiljgn, www.tero.desljgn, www.tero.desikogn, www.tero.deskogn, www.tero.design, www.tero.desgn, www.tero.desilogn, www.tero.deslogn, www.tero.desiuign, www.tero.desuign, www.tero.desi7gn, www.tero.des7gn, www.tero.desi9gn, www.tero.des9gn, www.tero.desi. gn, www.tero.des.gn, www.tero.desqign, www.tero.deqign, www.tero.deswign, www.tero.dewign, www.tero.deseign, www.tero.deeign, www.tero. deszign, www.tero.dezign, www.tero.desxign, www.tero.dexign, www.tero.descign, www.tero.decign, www.tero.de1sign, www.tero.d1sign, www.tero.de2sign, www.tero.d2sign, www.tero.decsign, www.tero.dcsign, www.tero.defdsign, www.tero.dfdsign, www.tero.degsign, www.tero.dgsign, www.tero.dehsign, www.tero.dhsign, www.tero.de5sign, www.tero.d5sign, www.tero.dqesign, www.tero. qesign, www.tero.dyesign, www.tero.yesign, www.tero.daesign, www.tero.aesign, www.tero.dsesign, www.tero.sesign, www.tero.dcesign, www.tero.cesign, www.tero.dgesign, www.tero.gesign, www.tero.d esign, www.tero. дизайн, www.tero.dvesign, www.tero.vesign,

Ошибки расширения TLD


tero.com, tero.ru, tero.net, tero.org, tero.de, tero.jp, tero.uk, tero.br, tero.pl, tero.in, tero.it, tero.fr, tero.au, tero.info, tero.nl, tero.ir, tero.cn, tero.es, tero.cz, tero.ua, tero.ca, tero.kr, tero.eu, tero.biz, tero.za, tero.gr, tero.co, tero.ro, tero.se, tero.tw, tero.vn, tero.mx, tero.tr, tero.ch, tero.hu, tero.at, tero.be, tero.tv, tero.dk, tero.me, tero.ar, tero.sk, tero.us, tero.no, tero.fi, tero.id, tero.xyz, tero.cl, tero.by, tero.nz, tero.ie, tero.il, tero.pt, tero.kz, tero.my, tero.lt, tero.io, tero.hk, tero.cc, tero.sg, tero.edu, tero.pk, tero.su, tero.рф, tero.bg, tero.th, tero.top, tero.lv, tero.hr, tero.pe, tero.rs, tero.club, tero.ae, tero.si, tero.az, tero.ph, tero.pro, tero.ng, tero.tk, tero.ee, tero.mobi, tero.asia, tero.ws, tero.ve, tero.pw, tero. sa, tero.gov, tero.cat, tero.nu, tero.ma, tero.lk, tero.ge, tero.tech, tero.online, tero.uz, tero.is, tero.fm, tero.lu, tero.am, tero.bd, tero.to, tero.ke, tero.name, tero.uy, tero.ec, tero.ba, tero.ml, tero.site, tero.do, tero.website, tero. мн, теро.мк, теро.га, теро.ссылка, tero.tn, tero.md, tero.travel, tero.space, tero.cf, tero.pics, tero.eg, tero.im, tero.bz, tero.la, tero.py, tero.al, tero.gt, tero.np, tero.tz, tero.kg, tero.cr, tero.coop, tero.today, tero.qa, tero.dz, tero.tokyo, tero.ly, tero.bo, tero. cy, tero.news, tero.li, tero.ug, tero.jobs, tero.vc, tero.click, tero.pa, tero.guru, tero.sv, tero.aero, tero.work, tero.gq, tero.ag, tero.jo, tero.rocks, tero.ps, tero.kw, tero.om, tero.ninja, tero.af, tero.media, tero.so, tero.win, tero.life, tero. ул, теро.см, tero.mu, tero.ovh, tero.lb, tero.tj, tero.gh, tero.ni, tero.re, tero.download, tero.gg, tero.kh, tero.cu, tero.ci, tero.mt, tero.ac, tero.center, tero.bh, tero.hn, tero.london, tero.mo, tero.tips, tero.ms, tero.press, tero.agency, tero.ai, tero. sh, tero.zw, tero.rw, tero.digital, tero.one, tero.sn, tero.science, tero.sy, tero.red, tero.nyc, tero.sd, tero.tt, tero.moe, tero.world, tero.iq, tero.zone, tero.mg, tero.academy, tero.mm, tero.eus, tero.gs, tero.global, tero.int, tero.sc, tero.company, tero.cx, tero.video, tero.as, tero.ad, tero.bid, tero.moscow, tero.na, tero.tc, tero.design, tero.mz, tero.wiki, tero.trade, tero.bn, tero.wang, tero.paris, tero.solutions, tero.zm, tero.city, tero.social, tero.bt, tero.ao, tero.lol, tero.expert, tero.fo, tero.live, tero. хост, tero.sx, tero.marketing, tero.education, tero.gl, tero.bw, tero.berlin, tero.blue, tero.cd, tero.kim, tero.land, tero.directory, tero.nc, tero.guide, tero.mil, tero.pf, tero.network, tero.pm, tero.bm, tero.events, tero.email, tero.порно, tero.buzz, tero.mv, tero.party, tero.works, tero.bike, tero.gi, tero.webcam, tero.gal, tero.systems, tero.ht, tero.report, tero.et, tero.pink, tero.sm, tero.jm, tero.review, tero.tm, tero.ky, tero.pg, tero.pr, tero.tools, tero.bf, tero.je, tero.tl, tero. фотографии, tero.pub, tero.tf, tero.cool, tero.fj, tero.отзывы, tero.support, tero.watch, tero.yt, tero.date, tero.technology, tero.укр, tero.mr, tero.services, tero.photography, tero.vg, tero.community, tero.gd, tero.lc, tero.help, tero.market, tero.фото, tero.codes, tero.dj, tero.mc, tero.gallery, tero.wtf, tero.uno, tero.bio, tero.black, tero.bzh, tero.gratis, tero.ink, tero.mw, tero.audio, tero.plus, tero.chat, tero.domains, tero.gy, tero.ooo, tero.tel, tero.training, tero.онлайн, tero.deals, tero.taipei, tero.cash, tero. подарок, tero.scot, tero.sr, tero.camp, tero.cloud, tero.house, tero.vu, tero.bi, tero.careers, tero.team, tero.istanbul, tero.museum, tero.love, tero.москва, tero.coffee, tero.desi, tero.menu, tero.money, tero.software, tero.cv, tero.hosting, tero.wf, tero.ye, tero.care, tero.direct, tero.international, tero.run, tero.бел, tero.church, tero.gm, tero.onl, tero.ren, tero.sl, tero.vision, tero.bar, tero.cards, tero.exchange, tero.school, tero.sz, tero.bank, tero.boutique, tero.fit, tero.kitchen, tero.kiwi, tero. предприятия, tero.amsterdam, tero.bb, tero.dm, tero.style, tero.brussels, tero.clothing, tero.dating, tero.wien, tero.bs, tero.business, tero.casino, tero.pictures, tero.ax, tero.cricket, tero.energy, tero.estate, tero.ферма, tero.gp, tero.institute, tero.nagoya, tero.place,

Лата Мангешкар Непобедима, потому что она была Непревзойденной

«Эта девушка вызвала у меня слезы», — такова была мгновенная реакция первого премьер-министра Свободной Индии Пандита Джавахарлала Неру на частную песню, написанную поэтом-лириком Прадипом, Aie mere watan ke logon, zara aankh mein bhar lo paani, jo Shaheed huve hain unki, zara yaad karo qurbani, представленный легендарной Латой Мангешкар. Beta, tum ne to aaj mujhe rula diya — таковы были его точные слова, когда рядом с ним стояла Индира Ганди.Ghar kab aarahi ho (Когда ты вернешься домой?), спросил он, когда Неру пригласил ее в резиденцию премьер-министра Тин Мурти на чай.

Неру описал китайско-индийскую войну 1962 года как Великое предательство, и он так и не оправился от шока, пока его конец не наступил 27 мая 1964 года. Когда Лата Мангешкар спела эту песню в присутствии Неру 27 января 1963 года , слезы катились в его глазах. Это было волшебное и завораживающее заклинание Латы Мангешкар.

Наргис отдала самую большую дань уважения Лате Мангешкар.Когда Лата стала первой индийкой, поставившей представление в Королевском Альберт-Холле в Лондоне в 1974 году, Наргис приветствовала Лату на возвышении волнующими словами: «Моазиз Хаватин-о-Хазраат, Лата киси тариф ке нахин балки парастиш ке каабиль хайн . Unki aawaaz солнце пе ке баад куч айса alamtaari хо джата хай, jise bayaan karna mushkil хай. Uhn samjhiye, jaise kisi Dargah ya Mandir mein jaayen, to wahaan pahunch kar Sar, ibaadat ke liye, khud-ba-khud jhukh jata hai aur aankhon se besaaqta aansoon behate hain.Лата. Китна чхота наам хай. Лекин, unki shaqsiyat bahut unchi hai. Гималаи се бхи унчи. Пхир эк мартеба Лата Мангешкар се дхар-кхвааст карти хун вох эк бар пхир стадия пар аайен аур йех гана сунайен: Сати ре, туджх бин джия удаас ре, йе кайси унбхуджх пьяас ре, аджаа».

Маллика-э-Тараннум Нур Джехан сказал о Лате Мангешкар: «Люди говорят, что Лата Джи считает меня феноменом. Я говорю, что это ее смирение. Лата есть Лата. Такой певицы, как она, еще не рождалось».

Лата Мангешкар шагала колоссом более шести десятилетий.Легенда при жизни, она получила свое высокое положение в жизни не даром от кого-то; но она изо всех сил старалась попасть туда и оставаться на вершине десятилетиями.

Нерувианская эпоха безошибочно была золотой эрой хинди-кино. В воздухе витали надежды, мечты и стремления. Был воздух оптимизма и ликования.

Поэты стали лириками. Появились разные типы музыкальных руководителей, каждый со своим стилем, например, Наушад, Шанкар-Джайкишен, Лакшмикант-Пьярелал, Кальянджи-Ананджи, Рошан и Рави, у всех был свой собственный стиль.Именно тогда музыка фильмов на хинди достигла новых высот. Лата Мангешкар достиг пика своего таланта в ту эпоху, где он оставался безальтернативным и непререкаемым.

Если Лата Мангешкар и осталась непобедимой, то только потому, что она была непобедима. С 30 000 песен, записанных на разных индийских языках, она была провозглашена Соловьем Индии.

Выход из Filmfare Awards

На пике своей певческой карьеры в 1966 году Лата решила не принимать Filmfare Awards с единственной целью — продвигать новые певческие таланты в хинди-кино.Далекая от того, чтобы быть властной, она хотела, чтобы новые таланты процветали. Но она оставалась самой популярной для исполнения песен в кино на хинди.

На самом деле единственная женщина-музыкальный руководитель Уша Кханна тоже пела песни, но и Лата исполняла песни под ее управлением.

Вечнозеленые песни Латы включают композицию Уша Кханна, Маджи мери кисмат ке, джи чаахе джахаан ле чал в Хум Хиндустани, которая была изображена на легендарном Аша Парех.

Были случаи, когда фильмы имели успех только благодаря ее песням в прокате.Голос Латы считался Даром Божиим.

Магия Мангешкара, так сказать, действовала, поскольку Аша Бхосле и младшие сестры, Уша и Мина, тоже имели довольно продолжительные возможности. Это доказывает, что именно талант поддерживал клан Мангешкар в беспощадной коммерческой индустрии.

Аша Бхосле однажды вспомнила, как призналась своей старшей сестре Лате, что нервничает из-за конкретной песни перед ее записью. Лата сказала Аше: «Сначала ты Мангешкар, а потом Бхонсле.Людям нравится, как поют Мангешкары. Просто будь собой и пой. Твоя песня станет хитом». Верная слову Латы, песня Аши стала хитом.

Именно то, как поют сестры Мангешкар, выделило их в киноиндустрии. Там было много певцов, но Лата отличилась. Это объясняет, как Лате удалось преодолеть жесткую конкуренцию и удержать свое положение на вершине.

Лата была в очень хороших отношениях со всеми современными ей певцами, несмотря на временное недопонимание с Мохаммадом Рафи, которое вскоре разрешилось.Однажды она сказала: «У нас есть одна общая черта. Мы все любим петь».

Навязчивые мелодии

Голос Латы Мангешкар преследовал поколения любителей музыки на разных языках. Ее исполнение газелей, несмотря на то, что она не знала урду, выделяло ее. Будучи жительницей Махараштры, она позаботилась о том, чтобы ее типичный акцент не отражался в ее исполнении песен. Она тщательно выучила правильное произношение слов на урду.

Лата Мангешкар достигла вершины и осталась там, исключительно благодаря своему таланту и умению петь сердцем, что тронуло сердца ее слушателей.Она столкнулась с жесточайшей конкуренцией и сумела ее преодолеть благодаря своему таланту и редкому пафосу в голосе, которым она была наделена. Никто не мог даже конкурировать с ней, так как никто другой не обладал тем качеством голоса, которое выделяло Лату Мангешкар в звездной плеяде.

Лата выдержала конкуренцию со стороны таких, как Нур Джехан, которая была правящей певицей в кино на хинди, когда Лата вошла в индустрию. Затем были Сурайя и другие певцы, такие как Шамшаад Бегум и Мубарак Бегум.

Кроме того, были такие, как Гита Рой, урожденная Датт, Суман Хемади, урожденная Кальянпур, Судха Малхотра, Уша Тимоти, Кришна Калле, Камал Барот (который пел в Гималаях Ки Год Мейн), Шарада из Хайдарабада (Дехо мера дил мачал гая) , Руна Лайла из Бангладеш, Вани Джайрам, Хемлата, Анурадха Паудвал и многие начинающие певцы, которые сделали решительную ставку.

Всем остальным удалось отличиться, но не удалось приблизиться к Лате Мангешкар.

Evergreen Numbers

Благодаря ее таланту и редкому качеству голоса ее песни увековечены.Ее величайшее исполнение — Гимн любви, от Pyaar kiya to darna kya в Mughal-e-Azam. Она привнесла в свой голос тот элемент неповиновения и дерзости, который был встроен в лирику Шакила Бадаюни, что сделало песню вневременной. Не менее привлекательной песней Латы Мангешкар является Yeh rang-e-mehfil, yeh jashn-e-bahara, aise mein uhn hi khirama-khirama, Alla kare tu bhi aajaaye в Mr X In Bombay.

Лата Мангешкар исполнила одни из лучших газелей под управлением музыкальных руководителей Рошана и Мадана Мохана.

На самом деле, Лата спела газели так, как не смогла бы ни одна другая певица. Даже Сурайя был удивлен эфирным качеством голоса Латы. На самом деле, Айе дилруба, назрэн мила, куч то миле, гхам ка сила в Рустаме Сохрабе показала, как Лата даже превзошла Сурайю.

Среди вечнозеленых номеров Латы: Agar mujh se mohobat hai mujhe sab apne gham de do in Aap ki Parchhaiyaan; Нагма-о-шер ки саугхаат кисе пеш карун в Газале; Худа-и-бартар, тери замин пар, замин ки хатир йе джунг кион хай и Джурм-э-ульфат пе хум лог саза дете хайн, кайсе надаан хайн, шолон ко хава де хайн в Тадж-Махале; Haal-e-dil uhn unhe sunaaya gaya, aankh hi ko zubaan banaya gaya in Jahaan Aara; О бекараар дил, хо чука хай мужх ко ансонон се пьяар в Коре; и Hai isi mein pyaar ki abroo, woh jafa karen, main wafa karun и Aap ki nazron ne samjha pyaar ke qaabil mujhe in Anpadh.

Магия Латы Мангешкар создала экранные образы многих звезд, таких как Мадхубала, Наргис, Нутан, Мина Кумари, Вахида Рехман, Виджаянтимала, Аша Парех, Мала Синха, Нанда, Шармила Тагор, Садхана, Сайра Бано и Калпана. Лата пела даже для Мандакини в Ram Teri Ganga Maili, Бхагьяшри Патвардхана в Maine Pyaar Kiya, Мадхури Дикшит и Каджол в Dilwaale Dulhania Le Jaayenge.

Лата Мангешкар могла петь любую песню с большой легкостью и удачей. Лата могла страстно петь Наат на языке Моголов-и-Азам: Beqas pe karam kijiye Sarkar-e-Madina.Точно так же ее Бхаджан, Прабху теро наам и Аллах теро наам, Ишвар теро наам в Хум Доно, пробуждает глубокие чувства преданности.

Лата умела петь и классические песни, как ни один другой современный певец. Например, Balma maane na в Оперном театре; Найнон мейн бадра чхайе в Мера Саая; и Koi matwala aayaa mere dwaare в Love In Tokyo — яркие примеры ее обучения классической музыке.

Некоторые из ее драгоценных камней включают: Aaj hai pyaar ka faisla aie Sanam, aaj mera muqaddar badal jaaiyega in Leader; Tere pyaar mein dildar в Mere Mehboob; Lo aayee Milan ki raat suhaani aaj в Aashiq; Тадап йе дин-раат ки; Нил Гаган ки чхаон мейн; и Тумхе йад карте-карте в Амрапали; Рук джа раат, слезы джа ре Чанда в Дил Эк Мандир; и Hum pyaar ka sauda karte hain ek baar на языке Zindgi.

Она исполнила несколько памятных песен, таких как
Apne, apne huve parlay in Apne Huve Paraaye; Sansaar se bhaage phirte ho, Bhagwan ko tum kya paaoge in Chitralekha; Тумхи мере Мандир, тумхи мери Пуджа в Кхандане; Чходх де саари дуния киши ке лийе, йех мунаасиб нахи адми ке лийе в Сарасвати Чандре; Раат бхи хай куч бхиги-бхиги и Тере бачпан ко джавани ки дуа дети хун в Муджхе Джин До; Суно саджна в Айе ​​Дин Бахаар Ке; Dil beqraar sa hai в Ишаре; Unki pehli nazar kya asar kargayi, mujh ko kya ho gaya hai Khuda jaane в первоапрельском дураке; Аджи хумсе рут кар кахаан джаайега в Аарзу; и Тера, мера пьяар Амар, фир кьон муджх ко лагта хай дар в Асли-Накли.

Ранняя борьба

Родившаяся 28 сентября 1929 года, Лата была старшей в семье Динанат Мангешкар, когда последний скончался в 1942 году.

Все 13 лет бремя заботы о большой семье легло на нее плечи, со всеми братьями и сестрами, Ашей, Ушей, Миной и братом Хридайнатхом Мангешкаром, зависящими от нее. Сразу же она начала работать на Мастера Винаяка, отца актрисы Нанды.

В 1945 году Лата переехала в Мумбаи, когда мастер Винаяк, помогавший ей в ее карьере, перенес штаб-квартиру своей компании в Мумбаи.В Мумбаи она начала формальное обучение классической музыке хиндустани у Устада Амана Али Хана из Бхиндибазар Гарана.

Prophetic Prediction

В 1948 году музыкальный руководитель Гулам Хайдер познакомил Лату с известным продюсером Шасдхаром Мукерджи, который работал над фильмом «Шахид». Но он пренебрежительно отнесся к Лате из-за ее тонкого голоса. Гулам Хайдер, который был ее наставником, был в ярости из-за Шасдхара Мукерджи и продолжал предсказывать, что придет время, когда продюсеры устремятся к ней, упадут к ее ногам и будут умолять ее спеть в их фильмах.Он действительно оказался пророческим.

Гулам Хайдер стал первым музыкальным руководителем, полностью доверившимся таланту Латы. Позже, за исключением О. П. Найяра, все остальные музыкальные руководители стремились уговорить Лату спеть для них.

Гулам Хайдер дал Лате большой прорыв в своем фильме «Маджбур» в 1948 году с песней Dil mera thoda, mujhe kahin ka na chhoda.

Барсаат, Поворотный момент

Лата Мангешкар была замечена в фильме «Махал», музыку к которому написал Кемчанд Пракаш.Ее песня, Aayega asnewala, была изображена на Madhubala, которая запустила ее.

Карьера Латы официально началась с Barsaat Раджа Капура в 1949 году, когда у него была совершенно новая команда с Наргис в роли героини, Шайлендра-Хасрат Джайпури в качестве авторов текстов и дуэт Шанкар-Джайкишен в качестве музыкальных руководителей. Лата Мангешкар стала самой востребованной певицей.

Фактически, Шанкар-Джайкишен официально запустил Лата Мангешкар. Раньше Лата подражала Нур Джехан. Но Шанкар-Джайкишен подарил Лате ее голос, который покорил воображение людей.Barsaat стал безудержной музыкальной сенсацией, и все песни оказались отличными хитами. За ним последовали Aah, Aawara, Shri 420, Chori-Chori, и все фильмы показали лучшее в Лате.

В параллельной плоскости музыкальный руководитель Наушад Али, который выпустил свой хит Anmol Ghadi с Нуром Джехааном в 1946 году, а позже, попробовав какое-то время Shamshaad Begum, вскоре обратился к Лате Мангешкар. «Лата» стала новейшей сенсацией, а «Байджу Бавара», «Амар» и «Мать Индия» стали большими музыкальными хитами.

Среди неизменных хитов Латы можно отметить ее песню в Amar, Na shikwa hai koyee, na koyee gila hai, salaamat rahe tu, yeh meri dua hai … Ajab teri mehfil mein dekha tamasha, kahin roshni hai, kahin hai andhera, muqaddar charaaghon ke badle huve hain, koyee bujh raha hai, koyee jal raha hai.

Пафос в ее голосе

Только Лата смогла передать пафос и разочарование Мадхубалы в фильме, которая в своем голосе узнает темную сторону главного героя, которого играет Дилип Кумар.

Читалкар Рамачандра также помог найти золотую жилу талантов в Лате. Mehfil mein jal uthi shama, parwane ke liye in Nirala снова был изображен на Madhubala, который стал хитом на все времена.

Анаркали, главную роль в котором исполнила Бина Рай, стал огромным музыкальным хитом. Yeh zindgi usiki hai, jo kisi ka ho gaya, pyaar hi mein kho gaya Латы остается одним из ее хитов на все времена. Альбела и Азад — одни из ее главных хитов. Лучше всего Лата пела в песне Main jagoon saari rain, sajan tum so jaao на языке Bahurani.Еще одна такая песня — Mujhe yaad karne waale, tere saath-saath hun main в Риште-Наате.

Эти песни до сих пор не имеют себе равных по качеству исполнения Латы Мангешкар.

Еще одним известным музыкальным руководителем, воспользовавшимся талантом Латы, был С. Д. Бурман. Ее Phaili huvi hai sapnon ki bahen, aajaa chal den kahin door в доме № 44 или ее Chaand phir nikla в Paying Guest гарантировали, что SD Burman зависела от Латы в плане хороших песен.

S D Команда Burman-Lata зарекомендовала себя как гарантия некоторых действительно захватывающих песен.Например, Yeh meri zindgi, ek paagal hawa и Raat ka sama, jhoome chandrama, tan mora nache re, jaise bijuria в Ziddi и Aaj phir jeene ki tamanna hai, Piya tose naina laage re и Mose chhal kiye jaai в Руководстве доказали широта таланта Латы Мангешкар.

Вместе с Лакшмикантом-Пьярелалом Лата добилась больших успехов в таких фильмах, как Parasmani, Sati Savitri, Aaye Din Bahaar Ke и Lootera. В «Мере Хумдум, Мере Дост» Лата дала два вечнозеленых числа: Аллах, йех ада, кайси хай ин хасинон мейн и Тум джаао кахин, тум ко ихтияар, хум джаай кахаан саджна, хум не то кия хай пьяар.

Вместе с музыкальным руководителем Рави Лата подарила несколько жемчужин, таких как Mori chham-chham baaje paayaliya и Laage na mora jiya в Gunghat. В «До Бадан» — ее волшебное число: «Ло аагаи унки яад, вох нахи аайе».

Озвучив музыкальные композиции Хеманта Кумара, Лата подарила такие драгоценные камни, как Куч дил не каха, куч бхи нахи в Анупаме; Aie mohobat mere, duniya mein tera kaam na tha in Bees Saal Baad; Man mora naache, tan mora naache в До Дил; и Ванде Матарам в Anand Math.

Даже для менее известных музыкальных режиссеров, таких как Г. С. Кохли, Лата Мангешкар создала хиты, такие как Mere do naina matwaare, kiske liye in Namaste Ji.

Противоречие, которого можно избежать

Лата Мангешкар поссорилась с Мохаммадом Рафи из-за тривиального вопроса, связанного с требованием гонорара для певцов. Этого спора можно было полностью избежать, но он сказался на мировых песнях из фильмов на хинди.

Лата и Мохаммед Рафи перестали петь вместе. Их поклонники пострадали сильнее всего. Дуэты Рафи были записаны вместе с Суманом Кальянпуром, который стал известен как Лата бедняка. Tum ne pukara aur hum chale aaye in Raaj Kumar был в этот период.

Это продолжалось какое-то время, прежде чем они залатали и возобновили совместное пение. Это стало огромным облегчением для любителей песен хинди кино.

Великие дуэты

Лата Мангешкар подарила незабываемые и волшебные дуэты с ведущими певцами своего времени.

С Мохаммедом Рафи она дала величайшие дуэты всех времен. Aawaaz deke humein tum bulaao, mohobat mein itna na hum ko sataao и Main chali, main chali peechhe-peechhe jahaan in Professor. Еще один такой яркий дуэт – Ek Shahenshah ne banwaake haseen Taj Mahal, saari duniya ko mohobat ki nishaani di hai в «Лидере».Более запоминающимся является дуэт Jeet hi lenge baazi hum, tum khel adhura chhoote na в незаконченном фильме Shola Aur Shabnam.

С Мукешем, ее дуэтом, Bahaaron thaam lo ab dil, mera mehboob aataa hai, в Namaste Ji; Mehtaab tera chehra и Oh shama, mujhe phoonkh de in Aashiq; Apni ulfat pe zamaane ka na pehra hota, to kitna achha hota in Sasuraal; и Aa ab laut chale в Jis Desh Mein Ganga Behti Hai до сих пор не дают покоя.

Один из таких волшебных дуэтов с Манной Дей — Тум Гаган ке Чандрама хо, главный дхара ки дхул хун в Сати Савитри.Их дуэты, такие как Yeh raat bheegi-bheegi в Chori-Chori и Pyaar huva iqraar huva hai pyaar se phir kyon darta hai dil в Shri 420, наложили волшебные чары на поколения любителей музыки.

С Махендрой Капур Лата дала незабываемые дуэты. Phool ban jaaunga, shart yeh hai magar in Pyaar Kiye Ja; Yeh kali jab talak phool ban ke khile, intezaar karo in Aaye Din Bahaar Ke; Zara sambhaaliye, adaayen aapki, ke mere haath se dil mera jaane laga in Bada Aadmi; и Tere pyaar ka aasraa chaahta hun, wafa kar raha hun, wafa chaahta hun in Dhool ka Phool.

С Хемантом Кумаром Лата спела несколько задушевных дуэтов, например, Ek baar zara phir keh do, mujhe sharma ke tum deewana в Bin Badal Barsaat.